Лада новый: Официальный сайт LADA

Содержание

LADA Vesta SW Cross — Официальный сайт LADA

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40

• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал

• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя

• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона

• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Подогрев передних сидений 3х уровневый (в Comfort для АТ)
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (4,3» монохромный дисплей, FM/AM с функцией RDS, USB, SD-карта, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)

• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой

• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Боковые подушки безопасности
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер

• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом

• Футляр для очков
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении
• Двойной пол багажного отделения
• Автовыключение света фар
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние

• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения

• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка потолка черного цвета
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет черный
• Отделка руля кожей
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый (в Comfort для АТ)
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (4,3» монохромный дисплей, FM/AM с функцией RDS, USB, SD-карта, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Крыша кузова черного цвета
• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала черного цвета
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Боковые подушки безопасности
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении
• Двойной пол багажного отделения
• Автовыключение света фар
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый (в Comfort для АТ)
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Боковые подушки безопасности
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Задний подлокотник
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Двойной пол багажного отделения
• Автовыключение света фар
• Атмосферная подсветка салона
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Усиленная тонировка задних стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Наружные зеркала с функцией электроскладывания
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Подогрев задних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Боковые подушки безопасности
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении
• Двойной пол багажного отделения
• Автовыключение света фар
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый (в Comfort для АТ)
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс. Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Боковые подушки безопасности
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Задний подлокотник
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Двойной пол багажного отделения
• Автовыключение света фар
• Атмосферная подсветка салона
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Усиленная тонировка задних стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Наружные зеркала с функцией электроскладывания
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый (в Comfort для АТ)
• Подогрев задних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Kамера заднего вида с динамическими линиями
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система LADA EnjoY Pro с встроенными сервисами Яндекс.Авто (8’’ TFT-IPS ёмкостный HD дисплей, FM, 2 USB, Bluetooth, голосовое управление, Hands Free со сдвоенным микрофоном и функцией шумоподавления, Apple CarPlay, Android Auto), 6 динамиков

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (4,3» монохромный дисплей, FM/AM с функцией RDS, USB, SD-карта, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (4,3» монохромный дисплей, FM/AM с функцией RDS, USB, SD-карта, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Обивка потолка черного цвета
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет черный
• Противосолнечный козырек водителя и пассажира с зеркалом
• Розетка 12V
• Розетка 12V для задних пассажиров
• Розетка 12V в багажном отделении

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте и поясничной поддержкой
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Обогреваемый руль с кожаной отделкой
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (4,3» монохромный дисплей, FM/AM с функцией RDS, USB, SD-карта, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Крыша кузова черного цвета
• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота
• Наружные зеркала черного цвета
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Спойлер
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

LADA в Город русских машин

LADA в Город русских машин — официальный дилер где купить Лада ВАЗ в Санкт-Петербурге

 


«Город русских машин» — официальный дилер крупнейшего производителя легковых автомобилей в России и Восточной Европе АО «АВТОВАЗ».

Мы осуществляем продажу и техническое обслуживание автомобилей LADA на выгодных для вас условиях. В нашем дилерском центре вы можете купить автомобиль в кредит или за наличный расчет, воспользоваться системой трейд-ин или приобрести транспортное средство в лизинг.

У нас представлен весь модельный ряд марки LADA:  LADA VESTA, LADA XRAY, LADA 4×4, LADA Largus и LADA Granta. Предварительно познакомиться с любой из моделей можно на тест-драйве.

К вашим услугам — сервисная зона, оборудованная в соответствии со всеми стандартами  и требованиями АО «АВТОВАЗ». Мы проводим все виды гарантийного и постгарантийного обслуживания и ремонта, в том числе кузовной и малярный, устанавливаем дополнительное оборудование. Всегда в наличии – запасные части и аксессуары в широком ассортименте.

Планируете приобретение автомобиля или ищете качественный сервис? Приезжайте в «Город русских машин»!

Ждем вас ежедневно с 9.00 до 21.00 по адресу: г. Санкт- Петербург, ул. Руставели, д.27. Тел. +7 (812) 331 03 32   

 

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге АВТОВЕК

 

АВТОВЕК — официальный дилер LADA в Екатеринбурге. Продаем все модели производителя АВТОВАЗ — Granta, Vesta, Largus, XRAY, 4X4, Niva

Предлагаем коммерческие и специальные модификации: бортовую платформу, фургон, социальное такси, автомобиль скорой помощи на базе популярных моделей бренда.

Каталог на официальном сайте Лада

Перед посещением автосалона Лада в Екатеринбурге вы можете получить подробную информацию об автомобилях онлайн. На официальном сайте мы публикуем:

  • перечень доступных вариаций кузова каждой модели;
  • комплектации и актуальные расценки;
  • подробное описание и технические характеристики;
  • фото экстерьера и интерьера.

Сервисное обслуживание и ремонт LADA в Екатеринбурге

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге также занимается сервисным обслуживанием автомобилей. По гарантии выполняем следующие виды работ:

  • компьютерную диагностику;
  • покраску;
  • ремонт двигателя;
  • кузовной ремонт любой сложности, в том числе замену стекол;
  • устранение поломок автоэлектрики;
  • ремонт подвески, КПП, других узлов;
  • развал-схождение.

Преимущества обращения к нам

Заботимся о покупателях. Обслуживаем клиентов в просторном комфортном помещении, предлагаем воду, горячие напитки и шоколад.

Предлагаем новые авто с пробегом. Чтобы подобрать подходящую, воспользуйтесь формой на сайте: менеджер обработает запрос, уточнит наличие или возможность доставки в город и перезвонит.

Выполняем диагностику и доработку. Новые машины диагностируем бесплатно. По вашему желанию ставим уникальное оборудование, например, электропривод на заднюю дверь.

Почему покупать у нас выгодно

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге предлагает:

Кредиты и рассрочку

Помогаем оформить автокредит в банках-партнерах, предоставляем рассрочку под 0%.

Скидки

Постоянным клиентам предоставляем скидки от 3–15% на запчасти, страхование, ремонт и техобслуживание, установку дополнительного оборудования.

Также проводим послегарантийное обслуживание и ремонт машин LADA, устанавливаем дополнительные детали — оригинальные запчасти завода-производителя и доступные аналоги.

Чтобы записаться на тест-драйв в удобное время, позвоните перейдите по ссылке в заявку, это удобно и быстро

одна платформа на всех — Авторевю

Сегодня Группа Renault представила свою очередную стратегию работы под названием Renaulution (то есть «революция Renault»). Казалось бы, прежний план был принят меньше года назад, но в июле 2020-го у компании сменился руководитель: в должность вступил Лука де Мео, перешедший из компании Seat. А как известно, новая метла по-новому метет.

В стратегии Renaulution много интересных моментов, но для нас наиболее любопытны планы, которые касаются АВТОВАЗа и бренда Лада (они входят в Группу Renault). И здесь точно намечается маленькая революция: в иерархии концерна Лада будет объединена с румынской маркой Dacia. Идеологически они близки и сейчас (оба бренда выпускают простые и недорогие автомобили), а впереди у них полная техническая унификация.

Сейчас Лада и Dacia используют четыре платформы на двоих. Все Дачии построены на тележке B0 (и ее производных), а у Лады также есть платформы Гранты, Весты и Нивы. При этом на Ладу приходится лишь четверть совокупного объема выпуска этих двух брендов. Впереди — оптимизация. По плану, к 2025 году обе марки полностью перейдут на модульную платформу CMF-B, которая уже использована для новых моделей Dacia Logan/Sandero. Общее количество моделей и типов кузова будет сокращено с 18 до 11, а совокупный объем производства превысит один миллион машин в год.

Что это значит для АВТОВАЗа? Через четыре года в Лету канут не только устаревшие Гранта и две Нивы, но и в целом удачная Веста. А собственный инжиниринг будет сводиться лишь к созданию новых «надстроек» для платформы CMF-B и адаптации машин для российских условий эксплуатации. Кстати, в плане Группы Renault марка Лада характеризуется как Rough & Tough («суровая и крепкая»).

Согласно плану Renaulution, в 2021 и 2022 годах АВТОВАЗ не представит ни одной полностью новой модели. Ближайшие премьеры назначены на 2023 год — это две модели B-сегмента (видимо, новая Гранта в двух вариантах). Еще одна B-машина запланирована на 2024 год: официально подтверждено, что это новая Нива, плюс показан новый рендер, который заметно отличается от концепт-кара трехлетней давности. А в 2025-м должна появиться Лада класса C — кроссовер. Напомним, все они будут созданы на единой реношной платформе.

Что касается марки Dacia, то в этом году на рынок выйдет серийный электромобиль Spring, по одной модели B-класса запланировано на 2022 и 2024 годы. А в 2025-м должна выйти первая Dacia класса C — тоже кроссовер. Общая цель союза Лада-Dacia — увеличение прибыли с трех до пяти миллиардов евро к 2025 году.

ЮГ-АВТО официальный дилер | Новые и авто с пробегом в Краснодаре, Новороссийске и Республике Адыгея. Адреса автосалонов.

За 23 года работы на рынке Краснодарского края и республики Адыгея мы приобрели бесценный опыт и доверие сотен тысяч автомобилистов. С каждым производителем заключен официальный дилерский договор. Десятки автосалонов Юг-Авто предлагают новейшие модели отечественных машин и иномарок, легковые и грузовые автомобили с пробегом, транспорт для семьи и бизнеса.

При обслуживании клиентов и выполнении работ мы ориентируемся на стандарты производителей, что гарантирует не только выгодное приобретение, но и сервис мирового уровня, долгий срок службы, нашу помощь во время всего периода эксплуатации.

С Юг-Авто вам не придется тратить время на поиск идеального предложения. Для того чтобы купить современный автомобиль, будь то элегантный седан или внушительный внедорожник, спортивное купе или семейный минивэн, достаточно посетить наши центры, где высококвалифицированные консультанты сориентируют вас по каждой модели.

Автосалоны дилерской сети Юг-Авто расположены в Краснодаре, Новороссийске, Майкопе, п. Яблоновский республики Адыгея. В каждом салоне предоставляется полный комплекс услуг по сопровождению сделки, техническому обслуживанию, предлагаются вспомогательные сервисы:

  • Тест-драйв. Прежде чем выбрать автомобиль, протестируйте его в реальных условиях, оцените оснащение и комфорт.
  • Кредит. Благодаря партнерским связям Юг-Авто с ведущими банками и финансовыми организациями, клиенты получают актуальные предложения и эксклюзивные кредитные пакеты.
  • Trade in. Покупка по программе Trade in позволяет существенно сэкономить время, получить справедливую оценку подержанной машины, выгодно обменять ее на новую или с пробегом.
  • Продажа автомобилей с пробегом. Каждый б/у автомобиль был проверен по чек-листу производителя и прошел многоуровневую предпродажную подготовку.
  • Лизинг. Грамотная оптимизация расходов компании, привлекательная схема выплат, высокая остаточная стоимость, возможность выкупа по завершении договора.
  • Корпоративное обслуживание. Персонифицированное сопровождение автопарка предприятия специалистом отдела по работе с корпоративными клиентами.
  • Помощь на дороге. Наши клиенты не остаются наедине с проблемами. Круглосуточная консультационная и юридическая поддержка, техническая помощь при аварии, эвакуация до ближайшего сервисного центра.
  • Специальные предложения. Регулярные акции, выгодные условия покупки, ремонта и обслуживания автомобиля.

Официальный сайт компании «Балтийский лизинг», услуги лизинговой компании

Получить дорогостоящую спецтехнику, оборудование, транспорт и другие активы можно без привлечения кредитов или расходования оборотного капитала. Проще и выгоднее воспользоваться механизмом финансовой аренды, известной также под названием «лизинг». В этом случае речь идет об аренде активов с правом последующего выкупа по остаточной стоимости. Услуга популярна у представителей разных сфер бизнеса.

Мы являемся первой универсальной лизинговой компанией России. Клиенты нашей фирмы быстро получают транспорт, оборудование, спецтехнику в пользование. При этом расчет за нее будет производиться поэтапно, согласно графику платежей. Внешне такое корпоративное сотрудничество может напоминать кредит или рассрочку, но в реальности это принципиально иной механизм.

Разница в том, что при кредитовании или рассрочке смена собственника происходит сразу, поскольку речь идет о прямой продаже, а лизинговый договор предусматривает лишь предоставление активов во временное пользование (юридически они остаются зарегистрированными на ту же компанию до окончания всех расчетов по договору).

Такой механизм имеет немало преимуществ:

  • Каждый платеж фактически является инвестицией, поскольку в конечном итоге имущество будет выкуплено по остаточной (в большинстве случаев — крайне низкой) цене. В этом отличие от обычной аренды, при которой уплаченные суммы являются лишь дополнительными расходами, а активы подлежат возврату.
  • Одобрение по лизинговой сделке получить проще, чем при кредитовании. При этом на оформление документации требуется меньше времени и усилий.
  • Лизинговые платежи разрешено относить на себестоимость, что может значительно снизить налогооблагаемую базу.

Предлагаем взять в лизинг разные виды оборудования и техники на выгодных условиях. Это удобный и практичный вариант для юридических лиц и ИП. Наша компания имеет филиалы во всех регионах России.

В каталоге есть новые и подержанные авто, спецтехника, оборудование, также работаем с недвижимостью. Предлагаются гибкие условия сотрудничества, в частности — предусмотрены разные суммы минимального аванса в зависимости от конкретной сделки. Действуют спецпредложения, благодаря которым активы можно приобрести значительно дешевле указанной на сайте суммы.

График погашения и прочие условия согласовываются с учетом бюджета и пожеланий клиента. Предварительное решение принимается всего за день, предлагаемое имущество застраховано.

Новая Лада (ВАЗ) Веста 2021 в автосалоне Алматы

Эту модель также ищут по поисковым запросам: lada vesta Алматы, lada vesta sedan Алматы, lada vesta цена Алматы, lada vesta купить Алматы, lada ваз vesta Алматы, lada vesta +в казахстане Алматы, lada vesta фото Алматы, lada vesta цена +в казахстане Алматы, lada vesta седан Алматы, автомобиль lada vesta Алматы, купить новую lada vesta Алматы, лада vesta Алматы, лады vesta Алматы, лада vesta фото Алматы, фото лады vesta Алматы, новая лада vesta Алматы, автомобиль лада vesta Алматы, лада веста Алматы, лады весты Алматы, ладой вестой цена Алматы, цена лады весты Алматы, лада веста цена Алматы, лада веста казахстан Алматы, лад веста купить Алматы, купить лада веста Алматы, купить ладо веста Алматы, авто лада веста Алматы, лада веста цена +в казахстане Алматы, цена лады весты +в казахстане Алматы, лада веста фото Алматы, фото лады весты Алматы, новая лада веста Алматы, новые лады весты Алматы, нова лада веста Алматы, лада веста характеристики Алматы, характеристики лады весты Алматы, лада веста седан Алматы, лада веста сколько Алматы, лада веста комплектации Алматы, комплектации лады весты Алматы, сколько стоит лада веста Алматы, лада веста фото цены Алматы, фото лады веста цена Алматы, комплектация лады веста цена Алматы, лада веста комплектации +и цены Алматы, цена новой лады весты Алматы, новая лада веста цена Алматы, новая лада веста фото Алматы, фото новой лады весты Алматы, купить лада веста +в казахстане Алматы, продажи лады весты Алматы, продажа лада веста Алматы, лада веста +в новом кузове Алматы, фото комплектаций лада веста Алматы, лада веста комплектации +и цены фото Алматы, новая лада веста цена фото Алматы, фото новой лады весты цена Алматы, лада веста новый кузов фото Алматы, машина лада веста Алматы, лада веста новая комплектация Алматы, комплектация новой лады весты Алматы, цены +и комплектации новой лады веста Алматы, новая лада веста комплектации +и цены Алматы, купить веста лада цены Алматы, лада веста +в новом кузове цена Алматы, лада веста фото +и кузова цена Алматы, лада веста официальный Алматы, лада веста дилер Алматы, лада веста официальный дилер Алматы, официальный дилер лады весты Алматы, технические характеристики лады весты Алматы, лада веста технические характеристики Алматы, автомобиль ладо веста Алматы, автомобиль лада веста Алматы, ладо веста цены характеристики Алматы, лада веста характеристики цена Алматы, стоимость лада веста Алматы, стоимость лады весты Алматы, лада веста фото характеристики Алматы, лада веста картинки Алматы, лада веста купить +у официального дилера Алматы, картинки лады весты Алматы, купить лада веста официальный Алматы, лада веста фото цены характеристики Алматы, лада веста купить новую Алматы, сколько стоит лада веста +в казахстане Алматы, официальная цена лады веста Алматы, лада веста официальный цена Алматы, лада веста официальный дилер цены Алматы, авто ладо веста продажи Алматы, продажа лада веста +в казахстане Алматы.

Обращаем ваше внимание на то, что данный интернет-сайт носит исключительно информационный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положениями статьи 395 Гражданского кодекса Республики Казахстан. Указанные цены могут отличаться от действительных цен дилеров на момент обращения в автосалон. Представленные на изображениях автомобили могут отличаться от серийных моделей. Для получения информации о наличии моделей с требуемой комплектацией, техническими характеристиками и цветовыми сочетаниями, а так же информации о точной цене автомобилей, пожалуйста, обращайтесь к менеджерам соответствующего автосалона с помощью специальной формы связи или по телефону.

Спросите эксперта: когда пора снова волноваться? И что такое «Back Buzz?»

Из июльского выпуска , 2017 г., Акустическая гитара | МАМИ МИНЧ

Q: Мой вопрос касается ладов нового для меня винтажного Gibson. Это B-25 1960-х годов (верх из массива ели и корпус из красного дерева с твердой спинкой и ламинированными сторонами, а также гриф из розового дерева) в довольно хорошей форме, и в какой-то момент у него даже был заменен пластиковый мост на мост из розового дерева (я понимаю, что это апгрейд).Лады кажутся оригинальными, но первые несколько ужасно плоские и имеют глубокие ямки. Стоит ли оставить старинные лады ради аутентичности гитары? Понятно, что с новым мостом не все оригинально. Элизабет, Нью-Йорк, Нью-Йорк

A: Поздравляю с новой старой гитарой. Вы правы, замена полого пластикового бриджа (и удаление глухих болтов, удерживающих его на месте) — это улучшение для этих гитар! Мне они всегда нравились — это аккуратные Гибсоны, которые были построены, чтобы быть менее дорогими, а надевание моста из розового дерева и костяного седла действительно улучшит звук.

Теперь о ладах: о ладах можно думать как о шинах вашего автомобиля. Они являются частью вашей гитары, которую часто используют напрямую, и в конечном итоге они обязательно изнашиваются. Их нужно время от времени заменять. Как и новый комплект покрышек, особенно с более красивым продуктом, ремонт лада не из дешевых, но после него они чувствуют себя намного лучше, и вы всегда рады, что сделали это. Большинство ладов изготовлено из 18-процентного никель-серебра, которое мягче, чем ваши стальные струны, и медленно изнашивается.Также доступны нержавеющая сталь и другие более твердые сплавы, но если лады тверже, чем ваши струны, компромисс будет заключаться в том, что ваши струны берут на себя основной удар износа; лады из нержавеющей стали могут никогда не изнашиваться, но ваши струны будут чаще ломаться.

Коллекционерам гитары очень нравится то, что мелкие детали являются оригинальными, но оригинальные лады будут крутыми, только если они находятся в пригодной для использования форме. Винтажные лады на рабочих инструментах обычно не считаются чем-то особенным или незаменимым.Лады предназначены для использования. Если на них есть легкие пятна или неравномерный износ, их, вероятно, можно выровнять и заправить, но если они настолько изношены и выдолблены, что больше не выполняют свою работу, пришло время для замены. Ваш специалист по ремонту выберет новую проволоку для ладов тех же размеров, и единственное, что вы заметите, когда они будут готовы, — это то, насколько легко на ней играть.

Q: Я слышу загадочное жужжание металлического лада, когда я использую каподастр выше четвертого лада на моем Martin 90-х.Это так странно — я не слышу этого, когда беру аккорды в гриф, только когда использую каподастр, но он довольно постоянный, и его действительно трудно игнорировать! Помощь! —Энни, Бруклин, Нью-Йорк

Нет ничего хуже, чем поиграть на гитаре в игру «погоня за этим кайфом». Конечно, не беря в руки твою гитару, я могу только догадываться, но я имею представление о том, что это могло быть. Если это происходит только тогда, когда вы надеваете капо на шею, и постоянно во время игры, вот возможный диагноз: проблема в том, что называется «гудением в спине».Это когда струна дребезжит о верхнюю часть ладов между гайкой и каподастром, и если вы часто играете с капо, это может очень раздражать. Ваш ремонтник может сделать несколько разных вещей в зависимости от того, что еще он замечает о гитаре. Она, вероятно, начала бы с того, чтобы убедиться, что анкерный стержень не перетянут. Она может поднять прорезь под гайку для этой струны (заполнив прорезь, установив регулировочную гайку или отрезав новую, более высокую), или она может поправить лады, чтобы убедиться, что ни один слегка высокий лад не виноват.Я сочувствую тебе; это довольно неприятная проблема, и вы не должны мучиться — отведите вас в ремонтную мастерскую!


Мэми Минч является совладельцем Brooklyn Lutherie. Она — бывший руководитель отдела ремонта Retrofret Guitars и активный блюзовый исполнитель.


Получите подобные истории в своем почтовом ящике


Спросите эксперта: как работает анкерный стержень?

Эта статья впервые появилась в июльском выпуске журнала Acoustic Guitar за 2017 год.


Жужжание струн — серьезное препятствие, и их часто трудно диагностировать. Загрузите наше БЕСПЛАТНОЕ руководство по выявлению и устранению 10 распространенных причин «гудения» строк.


Моя гитара новая, зачем ей сетап или лад? — 13th Street Guitars

Существуют различные причины, по которым новая гитара может плохо играть.

  • Плохая заводская настройка. — Большинство производителей гитар не прилагают больших усилий к окончательной настройке. Эта работа требует времени и точности.Крупные фабрики озабочены чистой прибылью и должны выпускать много гитар в день.
  • Плохая работа ладов с завода — Многие фабрики вообще не выравнивают лады после их вдавливания в гриф. Это оставляет много места для ошибок.
  • Влияние транспортировки и окружающей среды — Дерево со временем сжимается, расширяется, скручивается и сгибается. В зависимости от состояния дерева, в котором был сделан гриф, условий, в которых он был до вас, и условий, в которых вы сейчас играете на гитаре — у вас могут возникнуть некоторые проблемы.Ваша гитара могла быть построена 18 месяцев назад, отправлена ​​через океан на лодке, стояла на складе, а затем висела на стене в магазине в течение нескольких месяцев или отправлена ​​снова, подпрыгивая на грузовике, подъезжающем к вашей двери. Не удивляйтесь, если возникнут какие-то проблемы. Вероятно, это требует некоторой настройки и, безусловно, некоторых новых струн.
  • «Plek’d» на заводе. — Plek — замечательная машина, которая делает потрясающую работу. Однако для достижения хороших результатов Plek требуется талантливый оператор.Неправильная эксплуатация может привести к плохой работе с резьбой. Настройка по-прежнему выполняется человеком, и даже если ваши лады могут быть идеальными, настройка может быть ужасной. (мы видели это много). — это действительно отличных гитар, которые производятся несколькими производителями с помощью Plek, но есть и несколько неудачников. Последствия судоходства и изменения окружающей среды все еще сохраняются. Гитара могла быть идеальной, но снова вышла из строя с завода. Ведь это — это ведь из дерева! Если ваша гитара Plek’d не идеальна, приходите к нам.
  • «Проверено и установлено в США» — Это означает, что кто-то вынул гитару из коробки после того, как она прибыла из-за границы, и проверил ее. Если возникнут какие-либо серьезные проблемы, они будут решены, или гитара будет отклонена на этом этапе. Это не означает, что кто-то потратил час или два на то, чтобы набрать его. Люди, которые делают эту работу, скажут вам, что обычно на гитару требуется всего несколько минут. (у них много гитар)
  • «Установка в магазине» Установка от…. продавец? Есть ли у них полный рабочий день техник, который умеет настраивать гитары? Человек, который настраивает вашу гитару, должен быть в этом экспертом. В противном случае вы не сможете полностью раскрыть потенциал своего инструмента. Приятно, что они натянут его и отрегулируют анкерный стержень для вас, но эта бесплатная услуга обычно не совсем то же самое, что полноценная работа, выполненная мастером или мастером по установке.
  • Моя новая гитара отлично себя чувствует — Отлично! Вам может вообще ничего не понадобиться.Не стесняйтесь приносить его, и мы взглянем на него поближе. Мы решим любые найденные проблемы. Мы также сообщим вам, сможем ли мы улучшить его игру сейчас. Этот осмотр бесплатный. Если мы не верим, что сможем улучшить игру, мы не будем заставлять вас что-либо делать. Мы не хотим брать деньги и не предоставлять лучший инструмент для игры. Мы полагаемся на доверие и повторный бизнес наших клиентов.

Итак, все это говорит о том, что на самом деле есть компании, которые выпускают очень хорошие гитары.К сожалению, это меньшинство.

Свяжитесь с нами, если у вас есть вопросы. Не стесняйтесь приносить свою гитару в любое время, чтобы проверить ее.

Не позволяйте этому задеть вас

Это проблема, которая может немного сбить вас с толку …

Но что вызывает шум? В «жужжащем» звуке есть что-то, что делает его особенно раздражающим (если, конечно, вы не хотите создать жужжащий звук…)

Будь то муха, жужжащая вокруг вас, холодильник, жужжание электросети или что-то еще, это редко бывает «положительным».Для гитариста лада — это особая разновидность, которая может испортить их игровую жизнь. Однако помощь всегда под рукой, так что не волнуйтесь (пожалуйста).

Здесь мы рассмотрим основные причины и решения, чтобы вы могли перейти к производству только сладких, сладких тонов…

1. Техника: все в ваших руках

Это наиболее частая причина жужжания ладони. Для парней в магазинах также самое сложное, когда дело доходит до того, чтобы сообщить владельцу / игроку причину ажиотажа.Естественно, последнее, что вы хотите услышать от кого-то, — это критика вашей игры. В конце концов, музыканты могут быть кучкой эгоистов.

Как правило, причина в том, что фретт слишком далеко за намеченным ладом или недостаточно сильно прижимает струны. Сядьте с метрономом и медленно, но верно выполните несколько хроматических упражнений, чтобы убедиться, что вы правильно играете каждую ноту на каждой струне, уделяя пристальное внимание любым проблемным областям.

Например, вам может быть труднее играть на шестой струне на первом ладу, чем на первой струне на первом ладу.В качестве альтернативы, когда вы меняете игровую позицию вдоль грифа, вам может быть сложнее правильно ладить на определенных ладах на грифе. Все разные, но у тебя все получится.

Итак, прежде чем отправиться в местный музыкальный магазин, убедитесь, что виноват не ваш стиль игры.

2. Проблемы с гайкой (кхм!)

Иногда гайку упускают из виду, когда дело касается технического обслуживания. Со временем гайки могут иногда изнашиваться, что приводит к образованию канавок, которые слишком велики для струн (а иногда и вовсе не режутся очень хорошо).В этих случаях будет слышно жужжание лада. Обычно это можно отличить по тому факту, что струны будут гудеть, когда играешь открыто (без раздражения).

К счастью, новую гайку довольно легко исправить (в большинстве случаев), и она легко доступна. Однако, если у вас есть сложная трем-система, все может стать немного сложнее. На YouTube есть множество видеороликов, которые могут вам помочь, но в те моменты, когда вам нужна помощь, достойная мастерская по уходу / ремонту гитар и / или мастер по ремонту гитар исправит вашу работу без каких-либо проблем.

3. Деформированная или перекрученная шея

Если у вас жужжат струны, молитесь, чтобы проблема не в этом. Это можно исправить, но обычно это непросто. Иногда это обнаруживается по гудению, которое возникает на верхних ладах, или по удушению струн во время лада.

Причина, по которой это происходит, связана с изменениями влажности и температуры, и почему вам не следует оставлять гитару в условиях, когда они могут резко измениться.

Если у вас есть болт, вы можете попробовать найти новый, заменить его, работа сделана.Если у вас есть модель со сквозным отверстием или грифом, и вы подвержены деформации шеи, то, боюсь, вам придется убить свой инструмент огнем. Не совсем. Найдите мастера и посмотрите, что они могут с ним сделать (возможно, убить его огнем …)

Как недавно объяснил Том Куэйл, он путешествовал из Европы в Нью-Йорк, затем в Лас-Вегас, и его бедная гитара оказалась такой же скрученной и деформированной, как злодей Диснея. В настоящее время производители гитар используют процесс обжаривания древесины грифа, чтобы удалить как можно больше влаги (кашель…Ibanez), сводя к минимуму вероятность изменения влажности и температуры, полностью нарушая стабильность любимого грифа вашей гитары.

4. Установлено слишком низкое действие

Это также очень частая причина жужжания ладов. Установка слишком низкого строя может привести к тому, что струны будут гудеть о гриф во время игры, особенно когда вы бьете по струнам.

Хорошая настройка может исправить это, отрегулировав высоту седла. На электрогитаре это обычно довольно простая работа с фиксированным / жестким бриджем.Опять же, когда вы переходите на территорию плавающего тремоло, все, что я могу посоветовать, — это терпение, так как процесс настройки значительно медленнее. На акустической гитаре протокол еще сложнее.

Если вы не уверены, попросите кого-нибудь сделать это. Например, вы можете посетить местный магазин Dawsons. Ребята и девчонки должны легко в этом разобраться.

5. Шейный дуг (или его отсутствие)

Это тесно связано с высотой седла и настройкой.Гриф почти всех современных гитар имеет анкерный стержень, позволяющий регулировать «смычок» (небольшую кривизну). Причина в том, чтобы обеспечить некоторое расстояние между грифом и струнами (подумайте об этом как о луке и стрелах).

Типичная установка — это баланс между регулировкой высоты седла и грифа, чтобы обеспечить игровое действие, которое подходит игроку, при этом оставаясь интонированным и без шума ладов. Если вы чувствуете гудение повсюду или в какой-то части нижних ладов, это может быть причиной.

6. Высокие, неровные или изношенные лады

Если гудение локализовано на определенном ладу, это может быть причиной. Изношенные лады иногда могут быть отмечены видимыми впадинами или зазубринами. Если они действительно изношены, струна может даже задохнуться на ладу внизу.

Опять же, хороший мастер-мастер или гитарный техник должен быть в состоянии исправить это довольно легко, выполнив темное искусство « ладовое платье ». На самом деле, это не тёмное искусство, и если вы терпеливы и неплохо владеете руками, то можете сделать это сами.Но что это?

Когда мы говорим о термине «платье ладов», это в основном причудливый способ сказать, что мы выравниваем и изменяем форму ладов. Со временем лады изнашиваются, когда струна нажимается и прижимается к ним, по сути, опиливая их до тех пор, пока не останется тонкая канавка или углубление (или, что еще хуже, отсутствует кусок, как на одной из моих гитар много лет назад, я чуть не отрезал себе палец, когда Я сделал цельношаговый бенд на 15 ладу на 1-й и 2-й струнах). Сглаживая каждый лад, вы улучшаете долговечность и удобство игры на грифе.Отлично.

Мы рассмотрим процесс «переодевания лада» в другой статье, а пока я просто хотел сообщить вам, что означает этот термин.

Подводя итог …

Существуют и другие причины «шума», но перечисленные выше являются наиболее частыми. Если вас это беспокоит и вы установили, что это не проблема техники, зайдите в местный магазин Dawsons и позвольте ребятам взглянуть. После небольшого наряда и нового набора струн ваша гордость и радость снова исчезнут.

Если рядом с вами нет магазина Dawsons, откройте магазин по ремонту гитар в вашем районе, и они вас исправят. Когда ваша гитара настроена правильно, нет ничего лучше.

Как справиться с жужжанием ладов

Что проверять, если на вашей гитаре звучит надоедливое жужжание ладов.

Звук правильно настроенной гитары, когда каждая струна звучит в идеально настроенном аккорде, — это прекрасно.

Но гитары — сложные и чувствительные инструменты.Бывают моменты, когда что-то звучит немного не в порядке, например, дребезжание струны (или нескольких струн) о лады во время игры, обычно называемое «жужжанием ладов».

К счастью, не так сложно определить, откуда возникла эта неприятная проблема, и впоследствии исправить ее.

Во-первых, вы должны оценить свою технику. Если ваши струны гудят вверх и вниз по грифу, возможно, вы недостаточно сильно нажимаете на струны или помещаете палец слишком далеко за предполагаемый лад.Есть шумиха.

Однако, помимо вашей игры, это может быть проблема с вашей гитарой. Это облом, но вы или опытный гитарный техник можете решить эту проблему без промедления.




Ниже приведены некоторые типичные ситуации, которые стоит обратить внимание на гудение гитары и лада:

Неровные лады

Иногда один или несколько ладов могут выступать выше других, и это является проблемой. Как только вы нажмете этот лад, ужасное жужжание резко остановит вашу игру.Однако для их выравнивания все, что им нужно, — это простая повязка. Вы можете проверить, выровнены ли они линейкой. Кроме того, со временем на струнах могли образоваться бороздки на ладах, которые препятствовали бы правильной вибрации струн и вызывали гудение.

Низкое действие

Струна определяет, насколько высоко струны располагаются над ладами. Если они расположены слишком близко к грифу, это, скорее всего, вызовет жужжание ладов. В этом может помочь регулировка седел и моста.

Изучите орех

Если гайка изношена или на ней есть слишком глубокие канавки, струны будут сидеть слишком близко к грифу, а открытые струны будут гудеть.

Рельеф шеи

Кроме того, вам может потребоваться регулировка анкерного стержня. Гриф гитары должен иметь небольшой смычок, чтобы обеспечить некоторое расстояние между грифом и струнами. Слишком мало смычка — «задний смычок» — означает, что на нем не будет достаточно места, и открытые струны будут гудеть.Слишком много, и на гитаре будет труднее играть, учитывая высокое действие, которое она создает.

Струны

В некоторых случаях все, что вам нужно, — это сменить струны, если на вашем старом комплекте образовалась грязная пленка.


Все эти ситуации подчеркивают важность хорошей настройки для вашей гитары. Это позволит вам избавиться от шума и получить тот первозданный тон, который вы хотели в первую очередь.

Новое поколение датчиков FRET для надежного измерения кинетики активации Gαi1, Gαi2 и Gαi3 в отдельных клетках

Abstract

Рецепторы, связанные с G-белком (GPCR), могут активировать гетеротримерный комплекс G-белка с субсекундной кинетикой.Генетически закодированные биосенсоры на основе резонансной передачи энергии Фёрстера (FRET) идеально подходят для изучения таких быстрых сигнальных событий в отдельных живых клетках. Здесь мы сообщаем о создании и характеристике трех биосенсоров FRET для измерения активации Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 . Для обеспечения количественной долгосрочной визуализации биосенсоров FRET с высоким динамическим диапазоном требуются флуоресцентные белки с улучшенными фотофизическими свойствами.Поэтому мы используем самый яркий и наиболее фотостабильный вариант CFP, mTurquoise2, в качестве донора, слитого с субъединицей Gα i , и cp173Venus, слитый с субъединицей Gγ 2 , в качестве акцептора. Конструкции биосенсоров Gα i FRET экспрессируются вместе с Gβ 1 из одной плазмиды, обеспечивая предпочтительные относительные уровни экспрессии с уменьшенными вариациями в клетках млекопитающих. Сенсоры FRET Gα i показали устойчивый ответ на активацию эндогенных или сверхэкспрессированных альфа-2А-адренорецепторов, которая ингибировалась токсином коклюша.Более того, мы наблюдали активацию сенсора Gα i FRET в отдельных клетках при стимуляции нескольких GPCR, включая рецептор LPA 2 , M 3 и BK 2 . Кроме того, мы показываем, что датчики хорошо подходят для извлечения кинетических параметров из быстрых измерений в миллисекундном диапазоне времени. Это новое поколение биосенсоров FRET для активации Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 будет полезно для измерений на живых клетках, которые проверяют активацию Gα i .

Образец цитирования: van Unen J, Stumpf AD, Schmid B, Reinhard NR, Hordijk PL, Hoffmann C, et al. (2016) Новое поколение датчиков FRET для надежного измерения кинетики активации Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 в отдельных клетках. PLoS ONE 11 (1): e0146789. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146789

Редактор: Микель Гарсиа-Маркос, Медицинский факультет Бостонского университета, США

Поступило: 25 сентября 2015 г .; Дата принятия: 22 декабря 2015 г .; Опубликован: 22 января 2016 г.

Авторские права: © 2016 van Unen et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: У авторов нет поддержки или финансирования, чтобы сообщить.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Подкласс Gα i гетеротримерных G-белков состоит из 3 членов у человека, Gα i1,2,3 , кодируемого генами GNAI1, GNAI2, GNAI3 [1] и активируется широким диапазоном Рецепторы, сопряженные с G-белком. G-белки семейства Gα и участвуют во многих патологиях, от ожирения и диабета [2], функций иммунной системы [3] до их критических ролей на нескольких этапах биологии рака [4–7]. .Активация Gα i преимущественно связана с ингибированием аденилатциклаз, что приводит к снижению накопления цАМФ в клетках. Однако недавно активация Gα i была связана с несколькими другими молекулярными эффекторами, включая PI3K / Akt [8,9], ERK [10] и c-Src [5].

Измерение активации Gα i обычно проводят путем измерения ингибирования индуцированной форсколином продукции цАМФ. Подобно анализам фосфорилирования дальше по течению, такие измерения не имеют пространственного разрешения, имеют ограниченное временное разрешение и могут зависеть от значительных перекрестных помех и усиления или десенсибилизации сигнала [11–13].

Для исследования активации G-белка прямым путем с высоким пространственно-временным разрешением можно использовать генетически закодированные биосенсоры FRET (Förster Resonance Energy Transfer) или BRET (Bioluminescent Resonance Energy Transfer) [14]. Эти методы основаны на измерении безызлучательной передачи энергии от молекулы донора к молекуле акцептора, которая имеет место только тогда, когда донор и акцептор находятся в непосредственной близости друг от друга (<10 нм). Изменения расстояния или ориентации между донорным и акцепторным диполем приводят к изменениям в эффективности RET, которые могут быть определены количественно.

Методы RET позволяют регистрировать кинетику отдельных клеток с миллисекундным разрешением, что может быть использовано для определения межклеточной гетерогенности и записи фармакокинетических параметров. Более того, этот подход может регистрировать активацию GPCR в физиологических условиях in vivo [15].

i был успешно помечен люциферазой в различных внутренних сайтах и ​​использован для измерения BRET между различными субъединицами Gα i и GPCR [16–19] или Gγ [19].Также были выполнены измерения FRET между флуоресцентно меченными Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 и Gβ [20] или Gγ [21].

Для выполнения измерений FRET необходима спектрально перекрывающаяся пара донора и акцептора [24], и ранее было показано, что использование более ярких флуоресцентных белков может улучшить чувствительность измерений биосенсора FRET [22,23]. Чтобы получить надежные измерения FRET, которые исследуют активацию Gα i , мы соединили Gα i1 i2 и Gα i3 с самым ярким и наиболее фотостабильным мономерным циановым флуоресцентным белком (CFP), доступным в настоящее время, mTurquoise2. (mTq2) [25].В качестве акцептора мы использовали кольцевую пермутированную Венеру (cpVenus), слитую с Gγ 2 , который ранее использовался в качестве акцептора в единственной плазмиде Gα q сенсора FRET [26]. Мы используем единую плазмидную стратегию для облегчения протоколов трансфекции и обеспечения четко определенного соотношения экспрессии донора и акцептора в клетках [27]. Эта стратегия экспрессии должна значительно облегчить использование и воспроизводимость результатов этих датчиков. Мы представляем стратегию конструирования, проверки и характеристики этого нового поколения датчиков FRET для активации Gα i1 i2 и Gα i3 .Эти биосенсоры очень хорошо подходят для микроскопии живых клеток и могут использоваться для быстрых кинетических измерений в миллисекундном диапазоне, что позволяет характеризовать фармакологические лекарственные средства и определять on- и off-кинетику для агонистов и антагонистов в Gα и -связанных GPCR.

Результаты

Создание конструкций

Мономерный вариант CFP mTurquoise2, предпочтительный донор в парах CFP-YFP FRET из-за его высокого квантового выхода и фотостабильности [25], был вставлен в Gα i1 после аланина в положении 121 в петле αB-αC.Этот сайт встраивания, который, как было ранее показано, сохраняет скорости обмена нуклеотидов и GTPase реакции, сопоставимые с белками дикого типа [20]. Gα i1 -mTq2 проявляет локализацию плазматической мембраны при экспрессии в клетках HeLa (рис. 1A). Были проведены пробные эксперименты, чтобы проверить, подходит ли Gα i1 -mTq2 для измерения с помощью FRET активации комплекса гетеротримерного G-белка при активации GPCR. С этой целью как Gβ, так и Gγ могут быть помечены акцептором для измерения активации гетеротримерного G-белка с помощью FRET [20,21].Ранее мы показали, что самый высокий контраст FRET для Gα q достигается с cpVenus-Gγ 2 [26]. Поскольку Gα i имеет высокую структурную гомологию с Gα q и сайт, в который вставлен mTurquoise2, аналогичен, мы решили использовать здесь тот же акцептор FRET. Следовательно, чтобы ввести меченый гетеротримерный G-протеиновый комплекс в клетки, мы совместно экспрессировали Gα i1 -mTq2 вместе с акцептором FRET cpVenus-Gγ 2 и немаркированным Gβ 1 [26].Стимуляция коэкспрессированного адренергического рецептора α 2 2 AR) с UK14,304 показывает быстрое увеличение флуоресценции CFP и сопутствующую потерю сенсибилизированной эмиссии из канала YFP, отражающую потерю FRET. Потеря FRET может быть интерпретирована как диссоциация гетеротримеров или изменение относительной конформации донора и акцептора. Чтобы обеспечить устойчивую коэкспрессию различных компонентов мультимерного сенсора FRET, мы ввели субъединицы в одну и ту же плазмиду, как мы сообщали ранее для сенсора Gα q (рис. 1B) [26].В этой стратегии используется вирусный пептид 2A и последовательность IRES для обеспечения оптимальных относительных уровней донора (Gα i1 -mTq2) и акцептора (cpVenus-Gγ 2 ) в отдельных клетках при минимизации гетерогенности межклеточной экспрессии. в образце. После создания нашего первого варианта мы заметили, что Gα i1 -mTq2 неправильно локализован в цитоплазме многих клеток (Рис. 1C). Субъединица Gα i1 миристоилирована и требует наличия остатка глицина сразу после ее исходного метионина.Детальный анализ плазмидной последовательности выявил дополнительный стартовый кодон для Gα i1 -mTq2 перед нативным стартовым кодоном, генерируемый последовательностью IRES (фиг. 1B). Мы предположили, что в нашем первом варианте сенсора большая часть продуцируемого белка Gα i1 -mTq2 транслируется из вышележащего метионина в последовательности IRES, что не приводит к образованию миристоилированного белка. Мы удалили вышестоящий метионин с помощью ПЦР с полным вектором (см. Материалы и методы), в результате чего остался только нативный стартовый кодон Gα i1 -mTq2, за которым следует глицин, обеспечивающий консенсусную последовательность для миристоилирования.Действительно, после трансфекции клеток новой плазмидой мы наблюдали правильно локализованный Gα i1 -mTq2 (рис. 1B и 1C). Аналогичным образом были сконструированы датчик Gα i2 и датчик Gα i3 . Чтобы изучить коэкспрессию трех субъединиц (Gα i1 -mTq2, Gβ 1 и cpVenus-Gγ 2 ) из одной плазмиды по сравнению с тремя отдельными плазмидами, мы количественно оценили флуоресценцию CFP и YFP в этих двух экспериментальных условия (рис. 1D). Флуоресценция CFP и YFP в стратегии трансфекции одной плазмиды имела коэффициент детерминации r 2 , равный 0.64, тогда как трансфекции тремя отдельными плазмидами показали коэффициент детерминации r 2 0,36 между интенсивностью CFP и интенсивностью YFP. Другими словами, корреляция между экспрессией CFP и YFP лучше в конфигурации с одной плазмидой, что указывает на явное преимущество этой конструкции. Дополнительным преимуществом этой плазмиды является экспрессия белка 3: 1 выше и ниже последовательности IRES, что, как ранее было показано, приводит к предпочтительному соотношению экспрессии донора (CFP) и акцептора (YFP) для аналогичного Gα q FRET. датчик [27].Наконец, отдельные плазмидные конструкции упростят введение в первичные клетки, создание стабильных клеточных линий или трансгенных организмов с Gα i -сенсорами.

Рис. 1. Разработка и характеристика нового датчика Gα i1 .

(A) Типичное изображение, показывающее локализацию на плазматической мембране Gα i1 , слитого с mTurquoise2-Δ9, экспрессированного в клетках HeLa. (B) Схематический обзор плазмиды, содержащей pGβ-2A-YFP-Gγ 2 -IRES-Gα i1 -CFP, управляемую промотором CMV.На вставке показана последовательность ДНК, кодирующая конец последовательности IRES и начало последовательности Gα i1 . Предлагаемая трансляция белка показана в строке под последовательностью ДНК (однобуквенные сокращения аминокислот). (C) Конфокальные изображения локализации Gα i1 -mTurquoise2-Δ9 ( верхний ряд ) и cp173Venus-Gγ 2 ( нижний ряд ) в клетках HeLa, для варианта 1.0 ( левый столбец ) и вариант 2.0 ( правая колонка ) датчика Gα i1 .(D) Количественный анализ коэкспрессии каналов CFP и YFP трансфекций cp173Venus-Gγ 2 и Gα i1 -mTurquoise2-Δ9 в клетках HeLa. Трансфекция одной плазмиды ( слева, ) по сравнению с трансфекцией отдельных плазмид ( справа, ). Точки отображают интенсивность CFP и YFP, количественно определенную для отдельных отдельных ячеек. R 2 — коэффициент детерминации. Ширина отдельных изображений в A и C составляет 143 мкм.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0146789.g001

Показатели в анализах активации GPCR

Для тестирования нового биосенсора Gα i1 при визуализации живых клеток мы использовали хорошо охарактеризованный GPCR, который, как известно, связывается с адренергическим рецептором α i1 2 AR). Клетки HeLa, которые, как было показано ранее, содержат АР α 2 эндогенно [20], были трансфицированы биосенсором Gα i1 . При добавлении 10 мкМ UK14,304 мы наблюдали устойчивую потерю FRET, измеряя соотношение между флуоресценцией YFP и CFP биосенсора Gα i1 , которое было возвращено к исходному уровню добавлением 60 мкМ α 2 AR. антагонист Йохимбин (рис. 2А). Токсин коклюша (PTX), как было показано, инактивирует передачу сигналов Gα i в клетках посредством АДФ-рибозилирования субъединицы Gα и [28], что предотвращает его взаимодействие с GPCR. Активация Gα i1 была полностью отменена инкубацией в течение ночи с PTX, показывая, что слияние белка Gα i1 -mTq2 все еще остается чувствительным к PTX (рис. 2A). Чтобы подтвердить, что датчик может быть использован для анализа активации эндогенных рецепторов в первичных клетках Gα i1 , мы повторили этот эксперимент на HUVEC (эндотелиальных клетках пупочной вены человека).Добавление хорошо известного стимулятора HUVEC, S1P [29], вызывало стойкое снижение соотношения FRET для Gα i1 -сенсора (рис. 2B), ночная обработка PTX полностью устраняла этот ответ. Затем, чтобы исследовать, насколько надежен датчик Gα i1 на других анализах активации GPCR, мы протестировали множество GPCR, которые, как было показано, связаны с Gα i . Рецептор брадикинина 2B (BK 2B ) [30], рецептор лизофосфатидной кислоты 2 (LPA 2 ) [31,32] и рецептор мускаринового ацетилхолина 3 (M 3 ) [33,34] были совместно трансфицированы с биосенсор Gα i1 в клетках HeLa.После стимуляции соответствующими агонистами все три рецептора показали устойчивое снижение соотношения FRET биосенсора Gα i1 (рис. 2C). Рецептор M 3 также показал полное восстановление отношения FRET до исходного уровня после добавления антагониста атропина. Рецептор M 3 в основном известен своей передачей сигналов через Gα q . Тем не менее, предыдущие исследования показали активацию Gα i через рецептор M 3 [19,33–36], что согласуется с нашими наблюдениями.

Рис. 2. Производительность датчиков Gα i в анализах передачи сигналов GPCR в одной клетке.

(A) Эксперименты по визуализации соотношения FRET в клетках HeLa, трансфицированных датчиком Gα i1 . Быстрая потеря FRET, наблюдаемая по уменьшению отношения YFP / CFP, после стимуляции клеток 10 мкМ UK-14,304, специфического агониста α 2 AR, добавление 60 мкМ йохимбина возвращает соотношение FRET к исходным уровням. Ночная обработка (100 нг / мл) PTX устраняет ответ на Gα i1 -сенсор в клетках, стимулированных UK-14304.(B) Эксперименты по визуализации отношения FRET в Huvecs, трансфицированных датчиком Gα i1 . Устойчивая потеря FRET наблюдается после стимуляции 500 нМ S1P (сфингозин-1-фосфат). Ночная обработка (100 нг / мл) PTX устраняет ответ на Gα i1 -сенсор в S1P-стимулированных клетках. (C) Эксперименты по визуализации отношения FRET клеток HeLa, трансфицированных датчиком Gα i1 и BK 2B ( вверху справа ), LPA 2 ( вверху слева ), M 3 ( внизу справа ) и β 2 AR-2A2-m Черри ( внизу слева ) стимулировали 1 мкМ брадикинина (BK 2B ), 1 мкМ лизофосфатидной кислоты (LPA 2 ), 100 мкМ карбахолина и 10 мкМ карбахолина. (M 3 ) или 10 мкМ изопротеренола и 10 мкМ пропранолола (β 2 AR).Клетки HeLa, трансфицированные рецепторами BK 2B , LPA 2 и M 3 , демонстрируют четкое изменение соотношения YFP / CFP FRET при добавлении их соответствующих агонистов, тогда как стимуляция AR β 2 не изменяет FRET. передаточное отношение датчика Gα i1 . В контрольных условиях клетки HeLa, трансфицированные только сенсором Gα i1 , получали идентичные стимуляции. (D) Эксперименты по визуализации отношения FRET в клетках HeLa, трансфицированных датчиком Gα i2 или датчиком Gα i3 .Быстрая потеря FRET наблюдается после стимуляции клеток 10 мкМ UK-14,304, последующее добавление 60 мкМ йохимбина возвращает соотношение FRET к исходным уровням. Ночная обработка (100 нг / мл) коклюшного токсина (PTX) устраняет ответ на биосенсоры Gα i2 и Gα i3 в клетках, стимулированных UK-14304. Клетки HeLa стимулировали агонистом при t = 32 с, а антагонист добавляли при t = 152 с, где указано. Клетки Huvec стимулировали S1P при t = 55 с.Временные графики показывают среднее изменение отношения флуоресценции YFP / CFP (± s.e.m). Средние кривые состоят из данных по крайней мере 3 независимых экспериментов, проведенных в разные дни, с указанным количеством клеток ( n ) на условие.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146789.g002

В условиях контроля, например В отсутствие сверхэкспрессированного GPCR мы стимулировали клетки HeLa соответствующим агонистом и антагонистом и наблюдали лишь очень незначительный ответ на датчике Gα i1 в случае стимуляции LPA.Скорее всего, это связано с активацией эндогенных рецепторов LPA в клетках HeLa [37]. Когда мы котрансфицировали адренергический рецептор β 2 2 AR), ни одна из клеток не показала активацию Gα i1 в ответ на обработку агонистом и антагонистом (рис. 2C). Следует отметить, что β 2 AR является классическим активатором Gα s , но при определенных условиях сообщалось о переходе на Gα i [38]. Наши результаты согласуются с единственным известным нам исследованием, в котором используются аналогичные инструменты (сенсоры на основе BRET) и сходные условия (сверхэкспрессия β 2 AR и сенсоры гетеротримерных G-белков) [19].Также в этом случае не наблюдалась активация Gα i1 при стимуляции β 2 AR (и только небольшая активация Gα i2 и Gα i3 , которая была> 10 раз ниже, чем активация альфа-2C. адренорецептор, сильный активатор Gα i ).

Чтобы проверить работоспособность биосенсоров Gα i2 и Gα i3 , мы трансфицировали клетки HeLa их соответствующими плазмидами. Подобно эксперименту с биосенсором Gα i1 на рис. 2А, мы наблюдали устойчивую потерю FRET после добавления 10 мкМ UK14,304, и сигнал вернулся к исходному уровню при добавлении 60 мкМ йохимбина (рис. 2D).В этих экспериментальных условиях мы не наблюдали существенных различий в кинетике активации или амплитуде ответов между тремя различными субъединицами Gα и . И Gα i2 -mTq2, и Gα i3 -mTq2 все еще чувствительны к лечению PTX, как показано на отмене ответа FRET после инкубации с PTX в течение ночи (рис. 2D).

Быстрые кинетические измерения

Чтобы более подробно изучить субсекундную кинетику активации Gα i1 в живых клетках, клетки HEK293 котрансфицировали с помощью Gα i1 -сенсора и α 2 AR или рецептора аденозина A1. соответственно.Используя систему быстрой перфузии для нанесения лиганда, измерения FRET одной клетки показывают быструю потерю отношения FRET более чем на 15% после кратковременного применения 20 мкМ норэпинефрина. После отмывания лиганда сигнал FRET возвращается к исходным уровням. Это можно было воспроизвести несколько раз без видимой потери амплитуды сигнала (рис. 3A). Аналогичный ответ наблюдался для аденозинового рецептора A1 после непродолжительного применения эндогенного лиганда аденозина (30 мкМ) (рис. 3B).

Рис 3.Характеристики датчика Gα i1 при кинетических измерениях.

(A) Клетки HEK293, трансфицированные сенсором Gα i1 и α 2 AR, многократно стимулировались 20 мкМ норэпинефрина в течение интервалов, обозначенных короткими горизонтальными линиями. Представленные данные являются репрезентативными по крайней мере для шести различных трансфекций, выполненных в течение шести экспериментальных дней. Верхняя панель: эмиссия YFP, центральная панель: эмиссия CFP, нижняя панель: скорректированный и нормализованный коэффициент FRET.(B) Клетки HEK293, трансфицированные сенсором Gα i1 и аденозиновым A1-рецептором, стимулировали 30 мкМ аденозина, что показано короткой горизонтальной линией. Представленные данные являются репрезентативными по крайней мере для шести различных трансфекций, выполненных в течение шести экспериментальных дней. Верхняя панель: эмиссия YFP, центральная панель: эмиссия CFP, нижняя панель: скорректированный и нормализованный коэффициент FRET. (C) Увеличенное изображение он-кинетики активации Gα i1 , показывающее нормализованное соотношение FRET во время первой стимуляции эксперимента в (A), приспособленное к однокомпонентной экспоненциальной функции затухания с tau = 1160 мс и амплитудой = 0.18 (R = 0,99). (D) График разброса, показывающий средние экспоненциальные постоянные времени (тау) объединенных данных из (n = 10) индивидуальных подборов клеток HEK293, трансфицированных Gα i1 -сенсором и α 2 AR, стимулированных 100 мкМ норадреналина или объединенных данные (n = 14) по индивидуальным подборам Gα i1 -сенсора и аденозинового A1-рецептора, стимулированного 30 мкМ аденозина, соответственно. Планки погрешностей указывают 95% доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146789.g003

Эти быстрые измерения FRET можно использовать для оценки кинетики активации Gα i1 с разрешением менее секунды (рис. 3C), как показано крупным планом первой стимуляции в эксперименте, показанном на рис. 3А. Кривая была подогнана к однокомпонентной функции экспоненциального затухания, как описано ранее [39], в результате чего экспоненциальная постоянная времени (τ) составила 1160 мс.

Чтобы оценить точную динамическую кинетику датчика Gα i1 , клетки стимулировали насыщающими концентрациями лиганда (100 мкМ норэпинефрина или 30 мкМ аденозина).Каждый индивидуальный ответ был подогнан к однокомпонентной экспоненте, что привело к средним значениям τ для α 2 AR, равным 887 мс, и для аденозина A1, равным 963 мс (рис. 3D), что соответствует периодам полувыведения 614 мс и 668 мс соответственно. Эти значения хорошо согласуются с более ранними наблюдениями активации G-белка с помощью FRET [21,40,41].

Заключительные замечания

В этой рукописи мы описываем дизайн, конструкцию и характеристики трех новых биосенсоров FRET для измерения активации Gα i1 , Gα i2 , Gα i3 .Новые сенсоры содержат субъединицу Gα, слитую с донорским флуорофором, mTurquoise2, и субъединицу Gγ, слитую с cp173Venus, поскольку ранее было показано, что эта комбинация для сенсора FRET Gα q обеспечивает наибольший динамический диапазон [26]. Три субъединицы гетеротримеров (Gα i -mTq2, Gβ 1 и cpVenus-Gγ 2 ) были сконфигурированы на одной плазмиде, обеспечивая надежную коэкспрессию с предпочтительной стехиометрией. Мы показываем, что эти датчики хорошо подходят для микроскопии живых клеток и извлечения кинетических параметров с помощью ратиометрической визуализации FRET одной клетки.Стандартизованная компоновка этих биосенсоров FRET для активации G-белка повысит надежность и воспроизводимость экспериментов внутри и между лабораториями. Примером в данной статье является надежная работа датчика Gα i1 в трех разных лабораториях без оптимизации условий эксперимента.

Одним из ограничений биосенсоров на основе переноса энергии для гетеротримерных G-белков является то, что они зависят от сверхэкспрессии гетеротримеров, что может влиять на естественное предпочтение GPCR для определенного класса гетеротримерных G-белков.Мечение эндогенных субъединиц флуоресцентными белками потенциально может облегчить это.

Исключительная чувствительность этих датчиков позволяет надежно обнаруживать активацию Gα i в первичных клетках через эндогенные GPCR. Более того, эти биосенсоры можно использовать для прямого сравнения предпочтительных паттернов активации Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 между разными Gα i связанными GPCR, что может помочь в разработке терапевтических стратегий, нацеленных на Gα i . сигнальные пути [42].

Методы

Конструирование флуоресцентных слитых белков

Для вставки mTurquoise2-Δ9 (сокращенно mTq2) [25] в белки Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 , версию mTq2 с сайтами рестрикции Age1 на N-конце и C-конце. был сконструирован путем амплификации mTurquoise2 с прямым праймером 5′-ATaccggttctATGGTGAGCAAGGGCG-3 ‘и обратным праймером 5′-TAaccggtGATCCCGGCGGC-3’. Чтобы ввести Age1-сайт в Gα i1 -цитрин, мы выполнили полновекторную ПЦР на матрице RnGalpha i1 -Citrine [20] с прямым праймером 5′-ATaccggtGAACTCGCCGGCGTCATA-3 ‘и обратным праймером 5’-ATaccggtCGCCGTC -3 ‘.Чтобы ввести Age1-сайт в Gα i2 -цитрин, мы выполнили полновекторную ПЦР на матрице HsGalpha i2 -Citrine [20] с прямым праймером 5′-ATaccggtGAGGAGCAAGGCGTGCT-3 ‘и обратным праймером 5’- TAaccGAGTGG -3 ‘. КДНК, содержащая кодирующую последовательность для HsGalpha i3 с сайтом Age1, была синтезирована Eurofins (www.eurofins.nl). Разрезание продукта ПЦР mTq2 и новых векторов Gα i1 , Gα i2 и Gα i3 с помощью Age1 и последующее лигирование привело к RnGalpha i1 , меченному mTq2 после позиции 121, и HsGalpha i2,3 . mTq2 после положения 114, аналогично ранее описанному функционально меченному Gα i1,2,3 [20].

Для создания варианта 1.0 сенсора Gα i1 была проведена ПЦР на плазмиде mTq2-Gα i1 с прямым праймером 5′-AGGTCTATATAAGCAGAGC-3 ‘и обратным праймером 5′-TATggatccAGCTTAGAAGAGACCACAGTC-3’ для введения Сайт BamHI на С-конце и сайт NcoI на N-конце. Затем было выполнено тройное лигирование с продуктом ПЦР (разрезанным с помощью BamHI и NcoI), вектором, содержащим pGβ 1 -T2A-cp173Venus-Gγ 2 [43] (разрезанный с помощью BamHI и SacII), и вектором, содержащим pPRIG -IRES [44] (вырезано с помощью NcoI и SacII).Полученная плазмида, pGβ 1 -2A-YFP-Gγ 2 -IRES-MATT-Gα i1 -CFP, коэкспрессирует MATT-Gα i1 -mTurquoise2-Δ9 (нарушение локализации плазматической мембраны), pGβ 1 и cp173Venus-Gγ 2 (рис. 1B).

Для создания варианта 2.0 сенсора Gα i1 мы выполнили ПЦР с мутагенезом с вариантом 1.0 в качестве матрицы путем амплификации с прямым 5′-GAAAAACACGATGATAATATGGGCTGCACACTGAGC-‘3 и 5’-GCTCAGTGTGCAGCCCATATTATTTTGTCG.Полученная плазмида, pGβ 1 -2A-cp173Venus-Gγ 2 -IRES-Gα i1 -mTurquoise2-Δ9, коэкспрессирует Gα i1 -mTq2 (правильно расположенная на плазматической мембране) 1 и cpVenus-Gγ 2 (рис. 1B).

Чтобы создать единый плазмидный сенсор для Gα i2 и Gα i3 , мы выполнили ПЦР с расширением перекрывания [45]. Gα i2 -mTq2 амплифицировали с прямым праймером ‘5-acgatgataatATGGGCTGCACCGTGA-3’ и обратным праймером ‘5 -TATtctagaAGCTCAGAAGAGGCCGCAGT-3’, а Gα i3 -mTgatGCAGT-3 ‘амплифицировали с прямым праймером’ ACGTq2GatGatGat 5Gat и прямым праймер ‘5 -TATtctagaAGCTTAATAAAGTCCACATTCCT-3’.Другой ПЦР был выполнен на ранее описанном [26] одиночном плазмиде Gα q -сенсора с прямым праймером «5-GAAGTTTTTCTGTGCCATCC -3» и обратным праймером «5-GCAGCCCATattatcatcgtgtttttcaaag -3». Впоследствии описанный выше продукт ПЦР Gα i2 -mTq2 или Gα i3 -mTq2 смешивали с продуктом ПЦР датчика Gα q и использовали в качестве матрицы для третьей ПЦР с прямым праймером ‘5-GAAGTTTTTCTGTGCCATCC -3 ‘и обратный праймер’ 5- TATtctagaAGCTCAGAAGAGGCCGCAGT-3 ‘и прямой праймер’ 5- GAAGTTTTTCTGTGCCATCC-3 ‘и обратный праймер’ 5-TATtctagaAGCTTAATAAAGTCCACATTCCT-3 ‘соответственно.Затем полученные продукты ПЦР лигировали в основную цепь сенсора Gα q с помощью SacII и XbaI, в результате чего получали pGβ-2A-cp173Venus -Gγ 2 -IRES-Gα i2 -mTurquoise2-Δ9 и pG241 1 1. 2A-cp173Venus-Gγ2-IRES-Gα i3 -mTurquoise2-Δ9 соответственно. Последовательности плазмид доступны по запросу. Плазмиды будут распространяться через Addgene: http://www.addgene.org/Dorus_Gadella/. RnGα i1 -mCitrine и HsGα i2 -mCitrine были любезным подарком Скотта Гибсона [20].Обратите внимание, что кодирующая последовательность RnGα i1 отличается только одной аминокислотой от человеческого Gα i1 (S98A). Рецептор LPA 2 был получен с cDNA.org. BK 2 R [46], α 2 AR [21], M 3 R [47] и рецептор A1 [48] были описаны ранее. β 2 AR-P2A-mCherry — подарок от Анны Пьетрашевской (Амстердамский университет).

Культура клеток и подготовка проб

клеток HeLa (American Tissue Culture Collection: Manassas, VA, USA) культивировали в Амстердамском университете (Амстердам, Нидерланды) с использованием среды Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), снабженной глутамаксом, 10% FBS, пенициллином (100 Ед / мл). ) и стрептомицин (100 мкг / мл).Все среды для культивирования клеток были получены от Invitrogen (Bleiswijk, NL).

Клетки трансфицировали в 35-миллиметровой чашке со стеклянным покровным стеклом 24 мм Ø # 1 (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия), используя 1-2 мкл липофектамина 2000 в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen), 0,5-1 мкг плазмидной кДНК и 50 мкл OptiMeM (Life Technologies, Блейсвейк, Нидерланды). После инкубации в течение ночи при 37 ° C и 5% CO 2 покровные стекла помещали в камеру для клеток Attofluor (Invitrogen, Breda, NL) и погружали в среду для микроскопии (20 мМ HEPES (PH = 7.4), 137 мМ NaCL, 5,4 мМ KCL, 1,8 мМ CaCL 2 , 0,8 мМ MgCl 2 и 20 мМ глюкозы). Вся микроскопия живых клеток проводилась при 37 ° C.

Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) были приобретены у Lonza и культивированы в Sanquin Blood Supply (Амстердам, Нидерланды) на чашках, покрытых FN, в среде EGM-2 с добавлением одиночных клеток (Lonza, Verviers, Бельгия). HUVEC использовали в пассаже номер 4 или 5. В качестве метода трансфекции использовали систему трансфекции Neon (MPK5000, Invitrogen) и соответствующий набор для трансфекции Neon (Invitrogen).Один импульс генерировали при 1300 В в течение 30 мс для микропорации HUVEC с 2 мкг кДНК, затем клетки высевали на покровные стекла, покрытые FN.

Для быстрых кинетических измерений активации Gα i1 клетки HEK293 культивировали в Университете Вюрцбурга (Вюрцбург, Германия) в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, L-глутамина (2 мМ). (PAN Biotech GmbH, Айденбах, Германия), пенициллин (100 Ед / мл) и стрептомицин (100 мкг / мл) и хранили при 37 ° C в атмосфере 7% CO2.Клетки собирали и высевали на 24-миллиметровые покровные стекла, покрытые D-полилизином, при ~ 40% конфлюентности. Через три часа клетки временно трансфицировали 1,0 мкг рецептора (α 2 AR или аденозин A1) и 3,0 мкг pGβ 1 -2A-YFP-Gγ 2 -IRES-Gα i1 -mTq2 кДНК на 6 -луночный планшет с использованием реагента для трансфекции Effectene ® (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя. Среду для выращивания обновляли через 24 часа, и измерения проводили после общего времени инкубации 48 часов.Клетки содержали в среде для микроскопии (140 мМ NaCl, 5,4 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2, 10 мМ HEPES, pH 7,3) и постоянно суперлили с этим буфером или буфером, дополненным соответствующим лигандом, с использованием компьютера Устройство быстрой суперфузии с электромагнитным клапаном (ValveLink 8.2, Automate Scientific).

Широкопольная микроскопия

Ратиометрические измерения FRET в клетках HeLa (результаты представлены на рис. 2A, 2C и 2D) были выполнены с использованием широкопольного флуоресцентного микроскопа (Axiovert 200 M; Carl Zeiss GmbH, Германия) в Амстердамском университете (Амстердам, Нидерланды). выдерживали при 37 ° C, снабжали иммерсионным масляным объективом (Plan-Neoflor 40 × / 1.30; Carl Zeiss GmbH) и ксеноновую дуговую лампу с монохроматором (Cairn Research, Faversham, Kent, UK). Изображения были записаны с помощью охлаждаемой камеры устройства с заряженной связью (Coolsnap HQ, Roper Scientific, Tucson, AZ, США). Типичное время экспозиции составляло от 75 мс до 150 мс, а интервал камеры был установлен на 4×4. Флуорофоры возбуждались светом 420 нм (ширина щели 30 нм) и отражались на образец дихроичным зеркалом 455DCLP, эмиссия CFP регистрировалась фильтром BP470 / 30, а эмиссия YFP регистрировалась фильтром BP535 / 30 путем вращения колеса фильтров. .В экспериментах по совместной экспрессии YFP возбуждали светом 500 нм (ширина щели 30 нм) и отражали на образец дихроичным 515DCXR, а излучение регистрировали с помощью фильтра BP535 / 30. Регистрация была скорректирована на фоновый сигнал и, для изображения отношения FRET, просачивание эмиссии CFP в канал YFP (55% интенсивности, измеренной в канале CFP).

Для экспериментов FRET в HUVEC (результаты представлены на рис. 2B) микроскоп Zeiss Observer Z1 использовался в Sanquin Blood Supply (Амстердам, Нидерланды) с 40x NA 1.3 масляный иммерсионный объектив и возбуждающий источник света HXP 120 В. CFP возбуждали через кубический фильтр FRET (Exciter ET 436 / 20x и дихроичное зеркало 455 DCLP (Chroma, Bellows Falls, Вермонт, США)). Излучение направлялось на прикрепленный адаптер двойной камеры (Carl Zeiss GmbH, Германия), управляющий дихроичным зеркалом 510 DCSP (Chroma, Bellows Falls, Вермонт, США). Эмиссионные волны с длинами волн 455–510 нм направляются на эмиссионный фильтр ET 480/40 (Chroma, Bellows Falls, Вермонт, США), а затем фиксируются камерой Hamamatsu ORCA-R2.Длина волны излучения 510 нм и выше направляется на эмиссионный фильтр ET 540/40 м (Ludl Electronic Products, Нью-Йорк, США), а затем фиксируется второй камерой Hamamatsu ORCA-R2. Получение изображений осуществлялось с использованием программного обеспечения микроскопа Zeiss-Zen 2011. Все измерения были скорректированы на фоновый сигнал. Регистрация была скорректирована на фоновый сигнал и утечку эмиссии CFP в канале YFP ​​(62% от интенсивности, измеренной в канале CFP).

Для быстрых кинетических измерений активации Gα i1 (результаты представлены на рис. 3) визуализацию проводили на инвертированном микроскопе Zeiss Axiovert 200 в Университете Вюрцбурга (Вюрцбург, Германия), оборудованном масляным иммерсионным объективом 63x и фотометрическая система с двойным излучением (Till Photonics), описанная ранее [21].Трансфицированные клетки возбуждали светом от полихрома IV (Till Photonics). Освещение было установлено на 40 мс из общего времени интеграции 100 мс. Сигналы CFP (480 ± 20 нм), YFP (535 ± 15 нм) и отношения FRET (YFP / CFP) регистрировались одновременно (светоделитель DCLP 505 нм) при возбуждении на длине волны 436 ± 10 нм (светоделитель DCLP 460 нм). Сигналы флуоресценции регистрировались фотодиодами и оцифровывались с помощью аналого-цифрового преобразователя (Digidata 1440A, Axon Instruments). Все данные были записаны на ПК под управлением Clampex 10.3 (Axon Instruments). Полученные отдельные трассы были подогнаны к однокомпонентной функции экспоненциального затухания для извлечения экспоненциальной постоянной времени tau [39]. Полупериод активации (t 1/2 ) определяется как τ * ln2. В динамических экспериментах клетки стимулировали UK14,304 (10 мкм), йохимбином (60 мкм), брадикинином (1 мкм), LPA (1 мкм), карбахолом (100 мкм), атропином (10 мкм), изопротеренолом (10 мкм), пропранололом (10 мкм), S1P (500 нМ), 20 мкМ или 100 мкМ норэпинефрина или 30 мкМ аденозина в указанные моменты времени.ImageJ (Национальный институт здоровья) использовался для анализа необработанных изображений микроскопии. Дальнейшая обработка данных была выполнена в Excel (Microsoft Office), а графики и статистика были выполнены с использованием Graphpad версии 6.0 для Mac, GraphPad Software, La Jolla California USA, www.graphpad.com.

Конфокальная микроскопия

клеток HeLa, трансфицированных указанными конструкциями, получали с помощью конфокального микроскопа Nikon A1, оснащенного иммерсионным объективом 60x (Plan Apochromat VC, NA 1.4). Размер точечного отверстия был установлен на 1 единицу Эйри (<0,8 мкм).

Образцы

последовательно возбуждали лазерной линией 457 нм и 514 нм и отражались на образец дихроичным зеркалом 457/514. Эмиссия CFP фильтровалась через эмиссионный фильтр BP482 / 35; Эмиссию YFP фильтровали через эмиссионный фильтр BP540 / 30. Чтобы избежать проступания, изображения были получены в режиме последовательной строчной развертки. Все измерения были скорректированы на фоновый сигнал.

Благодарности

Мы благодарим Eelco Hoogendoorn (Амстердамский университет) и Marten Postma (Амстердамский университет) за помощь в анализе данных.Мы благодарим Йоррита Броертьеса (магистранта Амстердамского университета) и Денниса Ботмана (магистранта Амстердамского университета) за создание Gα i1 -mTurquoise2 и Gα i2 -mTurquoise2 соответственно. Мы благодарим Мерел Аджобо-Херманс, Анну Пьетрашевскую и Скотта Гибсона за предоставленные плазмиды.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JvU PLH CH JG TWG. Проведены эксперименты: JvU ADS BS NRR. Проанализированы данные: JvU ADS BS NRR CH JG.Написал статью: JvU ADS BS NRR PLH CH TWG JG.

Ссылки

  1. 1. Суки В.Н., Абрамовиц Дж., Маттера Р., Кодина Дж., Бирнбаумер Л. Геном человека кодирует по крайней мере три неаллеллических G-белка с субъединицами альфа i-типа. FEBS Lett. 1987; 220: 187–192. pmid: 2440724
  2. 2. Kimple ME, Neuman JC, Linnemann AK, Casey PJ. Ингибирующие G-белки и их рецепторы: новые терапевтические мишени при ожирении и диабете. Exp Mol Med. 2014; 46: e102. pmid: 24946790
  3. 3.Ван И, Ли Й, Ши Г. Регулирующая функция гетеротримерных белков G в иммунной системе. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2013; 61: 309–319.
  4. 4. Дорсам РТ, Гуткинд Ж.С. Рецепторы, сопряженные с G-белком, и рак. Нат Рев Рак. 2007; 7: 79–94. pmid: 17251915
  5. 5. Даака Ю. Белки G при раке: парадигма рака простаты. Sci STKE. 2004; 2004: re2. pmid: 14734786
  6. 6. Appleton KM, Bigham KJ, Lindsey CC, Hazard S, Lirjoni J, Parnham S и др.Разработка ингибиторов гетеротримерных субъединиц Gαi. Bioorg Med Chem. 2014; 22: 3423–3434. pmid: 24818958
  7. 7. Раймонд Дж. Р., Эпплтон К. М., Пирс Дж. Ю., Петерсон Ю. К.. Подавление сообщения GNAI2 при раке яичников. J Ovarian Res. 2014; 7: 6. pmid: 24423449
  8. 8. Гарсия А., Ким С., Бхавараджу К., Шенвалдер С.М., Кунапули С.П. Роль фосфоинозитид-3-киназы бета в агрегации тромбоцитов и генерации тромбоксана А2, опосредованной сигнальными путями Gi. Биохим Дж.2010. 429: 369–377. pmid: 20441566
  9. 9. la Sala A, Gadina M, Kelsall BL. G (i) -зависимое ингибирование продукции IL-12 опосредуется активацией пути фосфатидилинозитол-3-киназа-протеин-3-киназа B / Akt и JNK. J Immunol. 2005; 175: 2994–2999. pmid: 16116186
  10. 10. Kue PF, Daaka Y. Существенная роль G-белков в росте клеток рака простаты и передаче сигналов. J Urol. 2000. 164: 2162–2167. pmid: 11061948
  11. 11. Hur EM, Kim KT.Передача сигналов рецептора, связанного с G-белком, и перекрестные помехи: достижение быстроты и специфичности. Сотовый сигнал. 2002; 14: 397–405. pmid: 11882384
  12. 12. Брюс ДжиЭ, Штрауб С.В., Йол Д.И. Перекрестные помехи между передачей сигналов цАМФ и Са2 + в невозбудимых клетках. Клеточный кальций. 2003. 34: 431–444. pmid: 14572802
  13. 13. Фей Д., Краучер Д. Р., Колч В., Холоденко Б. Н.. Перекрестные помехи и переключатели сигналов в каскадах митоген-активируемых протеинкиназ. Front Physiol. 2012; 3: 355. pmid: 23060802
  14. 14.Lohse MJ, Nuber S, Hoffmann C. Методы резонансного переноса энергии флуоресценции / биолюминесценции для изучения активации рецепторов, связанных с G-белком, и передачи сигналов. Pharmacol Rev.2012; 64: 299–336. pmid: 22407612
  15. 15. ван Унен Дж., Вулард Дж., Ринкен А., Хоффманн С., Хилл С., Годхарт Дж. и др. Перспектива изучения передачи сигналов GPCR с помощью RET-биосенсоров в живых организмах. Mol Pharmacol. 2015. 88 (3): 589–595.
  16. 16. Гейлс С., Ван Дурм Дж.Дж., Шаак С., Понтье С., Першрансье Й., Одет М. и др.Исследование структурных перестроек, вызванных активацией, в предварительно собранных комплексах рецептор-G-белок. Nat Struct Mol Biol. 2006; 13: 778–786. pmid: 168
  17. 17. Gales C, Rebois RV, Hogue M, Trieu P, Breit A, Hébert TE и др. Мониторинг в реальном времени взаимодействий рецепторов и G-белков в живых клетках. Нат методы. 2005. 2: 177–184. pmid: 15782186
  18. 18. Ayoub MA, Maurel D, Binet V, Fink M, Prezeau L, Ansanay H, et al. Анализ в реальном времени индуцированной агонистами активации протеазо-активированного комплекса рецептор 1 / Galphai1, измеренный с помощью биолюминесцентного резонансного переноса энергии в живых клетках.Mol Pharmacol. 2007. 71: 1329–1340. pmid: 17267663
  19. 19. Saulière A, Bellot M, Paris H, Denis C, Finana F, Hansen JT и др. Расшифровка сложности предвзятого агонизма выявляет новый активный объект рецептора AT1. Nat Chem Biol. Издательская группа «Природа»; 2012; 8: 623–631.
  20. 20. Гибсон СК, Гилман АГ. Субъединицы Giα и Gβ определяют селективность активации G-белка α2-адренорецепторами. Proc Natl Acad Sci USA. Национальная академия наук; 2006; 103: 212.
  21. 21. Бюнеманн М., Франк М., Лозе М.Дж. С обложки: Активация белка Gi в интактных клетках связана с перестройкой субъединиц, а не с диссоциацией. Proc Natl Acad Sci USA. Национальная академия наук; 2003; 100: 16077.
  22. 22. Klarenbeek JB, Goedhart J, Hink MA, Gadella TWJ, Jalink K. Датчик цАМФ на основе mTurquoise как для FLIM, так и для логометрического считывания имеет улучшенный динамический диапазон. PLoS ONE. 2011; 6: e19170. pmid: 21559477
  23. 23. Спарта Б, Парджетт М, Минге М, Дистор К, Белл Дж, Олбек Дж.Для импульсов активности киназы, регулируемой внеклеточным сигналом (ERK), необходимы механизмы рецепторного уровня. J Biol Chem. 2015; 290: 24784–24792. pmid: 26304118
  24. 24. Hamers D, van Voorst Vader L, Borst JW, Goedhart J. Разработка биосенсоров FRET для систем млекопитающих и растений. Протоплазма. 2014; 251: 333–347. pmid: 24337770
  25. 25. Goedhart J, Stetten von D, Noirclerc-Savoye M, Lelimousin M, Joosen L, Hink MA и др.Структурно-управляемая эволюция голубых флуоресцентных белков в направлении квантового выхода 93%. Nature Communications. 2012; 3: 751. pmid: 22434194
  26. 26. Adjobo-Hermans MJW, Goedhart J, van Weeren L, Nijmeijer S, Manders EMM, Offermanns S, et al. Визуализация в реальном времени активации гетеротримерного G-белка Gq в живых клетках. BMC Biol. 2011; 9: 32. pmid: 21619590
  27. 27. Goedhart J, van Weeren L, Adjobo-Hermans MJW, Elzenaar I, Hink MA, Gadella TWJ. Количественная совместная экспрессия белков на уровне отдельной клетки — приложение к мультимерному датчику FRET.Дельпрато А.М., редактор. PLoS ONE. 2011; 6: e27321. pmid: 22114669
  28. 28. Бернс DL. Субъединичная структура и ферментативная активность токсина коклюша. Microbiol Sci. 1988. 5: 285–287. pmid: 2

    8

  29. 29. Ван Ф., Ван Броклин Дж. Р., Хобсон Дж. П., Мовафаг С., Зуковска-Гройец З., Мильстиен С. и др. Сфингозин-1-фосфат стимулирует миграцию клеток через рецептор клеточной поверхности, связанный с G (i). Возможное участие в ангиогенезе. J Biol Chem. 1999; 274: 35343–35350. pmid: 10585401
  30. 30.Ляо JK, Homcy CJ. Белки G семейства G alpha i и G alpha q связывают рецептор брадикинина с высвобождением релаксирующего фактора эндотелия. J Clin Invest. 1993; 92: 2168–2172. pmid: 8227332
  31. 31. ван Корвен EJ, Groenink A, Jalink K, Eichholtz T., Moolenaar WH. Пролиферация клеток, индуцированная лизофосфатидатом: идентификация и анализ сигнальных путей, опосредованных G-белками. Клетка. 1989; 59: 45–54. pmid: 2551506
  32. 32. An S, Bleu T, Hallmark OG, Goetzl EJ.Характеристика нового подтипа человеческого рецептора, связанного с G-белком, для лизофосфатидной кислоты. J Biol Chem. 1998; 273: 7906–7910. pmid: 9525886
  33. 33. Offermanns S, Wieland T, Homann D, Sandmann J, Bombien E, Spicher K и др. Трансфицированные мускариновые рецепторы ацетилхолина селективно связываются с белками G Gi-типа и Gq / 11. Mol Pharmacol. 1994; 45: 890–898. pmid: 81

  34. 34. Akam EC, Challiss RA, Nahorski SR. Профили активации G (q / 11) и G (i / o) в клетках СНО, экспрессирующих человеческие мускариновые рецепторы ацетилхолина: зависимость от агониста, а также от подтипа рецептора.Br J Pharmacol. 2001; 132: 950–958. pmid: 11181437
  35. 35. Хорниголд, округ Колумбия, Мистри Р., Раймонд П.Д., Бланк Д.Л., Челлисс Р.Дж. Доказательства перекрестного взаимодействия между мускариновыми ацетилхолиновыми рецепторами М2 и М3 в регуляции вторичных мессенджеров и сигнальных путей киназ, регулируемых внеклеточными сигналами, в клетках яичников китайского хомячка. Br J Pharmacol. 2003. 138: 1340–1350. pmid: 12711635
  36. 36. Blaukat A, Barac A, Cross MJ, Offermanns S, Dikic I. G-белок-связанный рецептор-опосредованная активация митоген-активируемой протеинкиназы через взаимодействие сигналов Galpha (q) и Galpha (i).Молекулярная и клеточная биология. 2000. 20: 6837–6848. pmid: 10958680
  37. 37. Jongsma M, Matas-Rico E, Rzadkowski A, Jalink K, Moolenaar WH. LPA — хеморепеллент для клеток меланомы B16: действие через рецептор LPA5, повышающий цАМФ. PLoS ONE. 2011; 6: e29260. pmid: 22195035
  38. 38. Хилл SJ, Бейкер JG. Взлеты и падения переключения Gs- на Gi-белок. Br J Pharmacol. 2003; 138: 1188–1189. pmid: 12711616
  39. 39. Hoffmann C, Gaietta G, Bünemann M, Adams SR, Oberdorff-Maass S, Behr B и др.Подход FRET на основе FlAsH для определения активации рецепторов, связанных с G-белками, в живых клетках. Нат методы. 2005. 2: 171–176. pmid: 15782185
  40. 40. Хайн П., Роша Ф., Хоффманн С., Дорш С., Николаев В.О., Энгельхардт С. и др. Активация GS ограничена по времени при инициировании передачи сигналов, опосредованной рецептором. Журнал биологической химии. 2006; 281: 33345–33351. pmid: 16963443
  41. 41. Hoffmann C, Nuber S, Zabel U, Ziegler N, Winkler C, Hein P и др. Сравнение кинетики активации M3-ACh-рецептора и конститутивно активного мутантного рецептора в живых клетках.Mol Pharmacol. 2012; 82 (2): 236–245 pmid: 22564786
  42. 42. Деванатан В., Хагедорн И., Келер Д., Пекса К., Черпокова Д., Крафт П. и др. Белок Gαi2 тромбоцитов является важным медиатором тромбовоспалительного поражения органов у мышей. Proc Natl Acad Sci USA. 2015; 112: 6491–6496. pmid: 25944935
  43. 43. Нагаи Т., Ямада С., Томинага Т., Итикава М., Мияваки А. Расширенный динамический диапазон флуоресцентных индикаторов для Ca (2+) за счет циркулярно пермутированных желтых флуоресцентных белков.Proc Natl Acad Sci USA. 2004; 101: 10554–10559. pmid: 15247428
  44. 44. Мартин П., Албагли О., Погги М.С., Булукос К.Э., Погнонец П. Разработка нового бицистронного ретровирусного вектора с сильной активностью IRES. BMC Biotechnol. 2006; 6: 4. pmid: 16409632
  45. 45. Хекман К.Л., Пиз Л.Р. Сплайсинг генов и мутагенез с помощью ПЦР-управляемого удлинения перекрытия. Nat Protoc. 2007; 2: 924–932. pmid: 17446874
  46. 46. Adjobo-Hermans MJW, Goedhart J, Gadella TWJ.Регулирование заякоривания мембраны PLCbeta1a его субстратом фосфатидилинозитол (4,5) -бисфосфатом. Журнал клеточной науки. 2008; 121: 3770–3777. pmid: 18957514
  47. 47. Ziegler N, Bätz J, Zabel U, Lohse MJ, Hoffmann C. Датчики на основе FRET для человеческих рецепторов M1-, M3- и M5-ацетилхолина. Bioorg Med Chem. 2011; 19: 1048–1054. pmid: 20716489
  48. 48. Klotz KN, Hessling J, Hegler J, Owman C, Kull B., Fredholm BB, et al. Сравнительная фармакология подтипов аденозиновых рецепторов человека — характеристика стабильно трансфицированных рецепторов в клетках СНО.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1998; 357: 1–9. pmid: 9459566

CNN и MSNBC обеспокоены будущим после Трампа

CNN и MSNBC процветали в годы правления Трампа, достигая новых высот в рейтингах и доходах, посвящая бесчисленные часы в прайм-тайм критике антагониста Белого дома, с которым их зрители просто не могли уйти.

Столкнувшись с будущим без Трампа, руководители конкурирующих кабельных новостных сетей в последние недели созывали звездных ведущих и продюсеров на частные встречи в поисках ответов на насущный вопрос: что дальше?

Люди в обеих сетях знают, что зрителям, которые ненавидят президента Трампа, могут больше не понадобиться ночные сеансы терапии с Рэйчел Мэддоу или Доном Лимоном.И избранный президент Джозеф Р. Байден-младший, похоже, вряд ли сможет круглосуточно и без выходных создавать драму и скандал, которые воскресили кабельные новости, превратив их из умирающего медиума в центр современной политики.

Таким образом, несмотря на то, что в прошлом месяце CNN побила рекорд по 40-летнему количеству просмотров, а MSNBC достигла самых высоких рейтингов с момента его основания в 1996 году, журналисты и руководители телеканалов говорят, что они обеспокоены предстоящим годом.

«Что происходит, — спросил один из телеведущих MSNBC, — когда мы вам не нужны?»

Беспокойство распространяется на высшие эшелоны.

Президент CNN, Джеффри А. Цукер, взвешивает, выходить ли из сети на фоне некоторой напряженности со своим новым боссом Джейсоном Киларом, исполнительным директором WarnerMedia, который имеет опыт работы в сфере технологий, а не журналистики. Г-н Цукер обдумывает свои варианты на каникулах и, вероятно, примет окончательное решение в начале нового года, по словам нескольких людей, проинформированных о его взглядах. На прошлой неделе MSNBC объявил о замене своего более чем десятилетнего лидера Фила Гриффина, создателя его популярного либерального состава.

Этот портрет постоянно меняющихся новостных сетей основан на интервью с почти дюжиной нынешних и бывших сотрудников CNN и MSNBC, большинство из которых пожелали остаться неназванными, чтобы откровенно рассказать о проблемах, волнующих топ-менеджеров. Большинство согласились с тем, что в 2021 году произойдет понижение рейтингов, говоря, что единственный вопрос — насколько он будет большим.

Отказ Трампа спокойно покинуть политическую сцену заставил зрителей наблюдать за происходящим сквозь послевыборное оцепенение. В последние недели CNN регулярно обыгрывает Fox News, давнюю No.1 кабельная новостная сеть, всего зрителей. CNN также лидирует в группе людей в возрасте до 54 лет, ориентированных на рекламодателей каждый день, на протяжении более месяца, что является самой продолжительной такой серией после событий 11 сентября 2001 года.

«Утренний Джо» от MSNBC превзошел Трампа. фаворит утреннее шоу Fox News «Fox & Friends» четыре недели подряд, а ведущая телеканала MSNBC, г-жа Мэддоу, одержала самые большие победы почти за два года. Непрекращающаяся пандемия также поддерживает рейтинги, что является обычным явлением для кабельных новостных сетей во время таких событий, как войны, ураганы и массовые убийства.

Но руководители сетей, которым платят за разработку стратегии на месяцы и даже годы вперед, обращают свое внимание на пост-Трамповскую, поствакцинальную Америку и на изменившиеся привычки просмотра, которые они могут там найти.

В CNN, которая последние четыре года фокусировалась почти исключительно на политике, эти вопросы совпадают со сдвигом в корпоративном руководстве. Дедушка кабельных новостей теперь контролируется AT&T, которая выбрала г-на Килара, исполнительного директора-основателя потоковой платформы Hulu, чтобы возглавить ее развлекательное и новостное подразделение WarnerMedia.

В начале декабря г-н Килар посетил офисы CNN в Нью-Йорке и Вашингтоне и провел индивидуальные встречи с известными ведущими, со многими из которых он встречался впервые, по словам пяти человек, знакомых с этим вопросом. посещения. Г-н Килар хотел, чтобы на встречах представился и рассказал о своем энтузиазме по поводу их работы, а также о своем последнем проекте, потоковом сервисе под брендом CNN, сказали люди.

Встречи совпали с неуверенностью в CNN по поводу судьбы г-наЦукер, практический лидер, который пользуется лояльностью своих ведущих и звездных корреспондентов. Бывший исполнительный директор NBCUniversal, Цукер, как известно, занимается микроменеджментом журналистики сети, звонит в диспетчерские и шепчет в наушники ведущим во время важных интервью.

Он также является лицом новостной сети, осажденной президентом, который пытался ложно заклеймить CNN как воплощение «фейковых новостей», сплотив своих консервативных поклонников против этого. Атаки г-на Трампа произошли в то время, когда CNN получала угрозы.В 2018 году сети пришлось эвакуировать свой офис в Нью-Йорке из-за взрыва почтовой бомбы.

Г-н Цукер, контракт которого продлится до следующего года, искренне сомневается, оставаться ли ему, по словам нескольких людей, осведомленных о его взглядах.

CNN демонстрирует рекордно высокие рейтинги, которые, по мнению немногих в отрасли, будут повторяться снова, что дает г-ну Цукеру возможность выйти на первое место после восьмилетнего пребывания в должности. С другой стороны, ему нравится быть в центре событий, и он чувствует себя обязанным вести сеть через период политической и корпоративной неопределенности.

Его новый босс, г-н Килар, в CNN осторожно рассматривается как технический евангелист с небольшим опытом сбора новостей, особенно кровавого спорта, связанного с освещением политики в разделенной нации. И г-н Цукер был глубоко недоволен, когда г-н Килар, который возглавил WarnerMedia в мае, снял с него несколько обязанностей, включая надзор за коммуникациями сети и отделом кадров, как сказали двое из людей. По словам одного из собеседников, г-н Цукер получил предупреждение только перед тем, как было объявлено об изменениях.

Г-н Килар, который живет в Лос-Анджелесе, мало что сделал для своего дела среди журналистов CNN в прошлом месяце, когда он отправил записку, поздравляющую сеть с освещением выборов, только для того, чтобы включить несколько фактических ошибок в свои первые два предложения. В служебной записке неправильно говорилось, что CNN «проложил путь», позвонив в Аризону для г-на Байдена (на самом деле, Fox News и Associated Press назвали гонку в Аризоне днями ранее), и ошибочно сказано, что Аризона — это последний штат, по прогнозам CNN ( это различие принадлежало Джорджии и Северной Каролине).

После того, как меморандум был разослан, г-н Килар и г-н Цукер встретились за частным, социально дистанцированным обедом недалеко от штаб-квартиры CNN Hudson Yards на Манхэттене. В знак того, что г-н Килар, похоже, стремится сохранить г-на Цукера на борту, исполнительный директор WarnerMedia похвалил его в недавних интервью The New York Times, поставив президента CNN в одну лигу с основателем сети.

«Я хочу, чтобы вы услышали громко и ясно, что я думаю, что двумя лучшими вещами, которые когда-либо происходили с CNN, были Тед Тернер и Джефф Цукер», — сказал Килар.

В отдельном интервью г-н Килар добавил: «Я думаю, что для Джеффа было бы здорово остаться здесь в течение следующих 50 лет».

В MSNBC уже произошла преемственность.

Объявление о том, что Рашида Джонс, 39-летний руководитель службы новостей, которая станет первой чернокожей женщиной, возглавившей общую кабельную новостную сеть, сменит г-на Гриффина, было сделано в то время, когда NBCUniversal размышляет о том, как сеть, известная своей анти- Мнение Трампа должно восстановиться в эпоху Байдена.

Сезар Конде, бывший руководитель Telemundo, который сейчас является председателем отдела новостей NBC, подошел к ведущим и продюсерам, чтобы обсудить, что MSNBC должно двигаться дальше.

Аудитория сети росла во время президентства Трампа, предоставляя многочасовые разговоры об импичменте, налоговых декларациях президента, Сторми Дэниелсе, мероприятиях по распространению информации в Белом доме и выборах.

Но зрители MSNBC могут быть непостоянными. Продюсеры с изумлением наблюдали за тем, как рейтинги падают в «периоды хороших новостей» для президента Трампа.Например, количество зрителей резко упало в первые дни после публикации доклада спецпрокурора Роберта Мюллера III о Трампе и России, выводы которого разочаровали многих демократов.

Зрители MSNBC также отключились после подтверждения судьи Бретта Кавано Верховному суду, и они по большей части пропустили февральское обращение г-на Трампа о положении в стране, которое имело место, когда его заверили в оправдании по делу об импичменте в Сенате.

С Mr.Трамп настолько важен для роста рейтингов MSNBC, что некоторые продюсеры видят приближение сползания. Другие в сети говорят, что трампизм — с сопутствующей ему пристрастностью и политизацией общества — будет сохраняться, удерживая зрителей взаперти даже после того, как г-на Трампа больше не будет в Белом доме. На данный момент г-н Конде сосредоточен на поиске способов познакомить зрителей MSNBC с новостными программами потокового сервиса NBCUniversal, Peacock и сетевых подкастов.

Г-н Гриффин, глава исходящей сети, проводил передачи общественного мнения MSNBC, возвышая г-жуМэддоу в 2008 году стал постоянным якорем. Его замена, г-жа Джонс, происходит из репортерской части NBC News, где, помимо прочего, она курировала политические события, такие как первичные дебаты.

Пока ответы не материализуются, MSNBC может продолжать вести дела в обычном режиме, поскольку г-н Трамп продолжает вызывать беспокойство у своих либеральных зрителей. В этом месяце «Шоу Рэйчел Мэддау» лидирует в рейтингах своего конкурента Fox News, «Хэннити», впервые с февраля 2019 года.

Николь Сперлинг предоставила репортаж.

Выбор ладов и уход за ними

Мир ладов может быть пугающим (не говоря уже о чрезвычайно запутанном), но сегодня я собираюсь дать вам обзор различных типов ладов, а также различных брендов, которые вы можете выберите из них и несколько советов, как за ними ухаживать. Вот уже несколько лет я являюсь менеджером уважаемой ремонтной мастерской San Francisco Guitarworks. Нас уважают в США за наш опыт работы с резьбой, и поэтому я надеюсь, что мой личный опыт поможет вам разобраться в огромном количестве информации и мнений, которые существуют.

Прежде чем мы начнем, я бы порекомендовал попробовать как можно больше ладов разных типов и размеров — ничто не заменит выработку собственных предпочтений. Тем не менее, это также помогает точно знать , почему вам нравится то, что вам нравится, и именно для этого я здесь — чтобы в следующий раз, когда вы услышите ’47 × 104′, вы не будете сбиты с толку, независимо от того, покупка новой гитары или выбор нового лада для любимого Gibson L-5.

Материалы лада

Никель

Самый простой лад, который входит в стандартную комплектацию гитар различных брендов.Если ваша гитара не указывает, что она поставляется с ладами из нержавеющей стали прямо на выходе, у вас, скорее всего, есть никелевые лады. Хотя его обычно называют «никелевым серебром», оно совсем не содержит серебра. Со временем никелевый лад изнашивается при игре — в конце концов, это может вызвать потребность в уровне ладов или даже в повторном ладу, в зависимости от возраста инструмента и того, как часто на нем играют. Доказательства необходимости в уровне часто могут зависеть от множества факторов, но выемки на вершинах ладов могут быть верным индикатором.

Нержавеющая сталь

Как вы, возможно, уже догадались, лады из нержавеющей стали сделаны из нержавеющей стали, которая является более твердым материалом, чем никелевый лад, и, согласно JESCAR (см. Ниже), имеет более зернистую структуру. В результате получился продукт, который обеспечивает практически легкую стеклянную игру и долговечность, поскольку нержавеющая сталь (SS) гарантирует высокое качество жизни ладов. Часто лады SS дороже в установке, потому что они сложнее для инструментов, которые мастера используют для работы с ними, но не заблуждайтесь, если долговечность — это то, что вам нужно, долгосрочные выгоды окупаются начальными вложениями.

Стоит отметить одну вещь: некоторые утверждали, что лады SS «осветляют» тон инструмента, но мастера по-прежнему расходятся во мнениях по этому поводу, и большинство считают, что разница достаточно незначительна, чтобы не отговаривать вас от потенциальных возможностей. преимущества нержавеющей стали.

EVO Золото

Золотая проволока

EVO изготовлена ​​из медного сплава (по данным Luthiers Mercantile International, элементный состав CuSn15Fe1Ti0.1 — больше вы знаете). Одна из причин, по которой некоторые гитаристы не любят использовать никель, заключается в аллергии на металл, а золото EVO соответствует требованию «не содержит никель», более износостойкое, чем никель, но не такое твердое, как нержавеющая сталь.Еще одна причина, по которой людей привлекает золото EVO, — это цвет. По внешнему виду он похож на 12-каратное золото, он сохраняет этот красивый вид, когда лады одеты, и никогда не будет выглядеть медным или изношенным.

Марки и размеры

Есть два основных бренда в индустрии ладов. Вы, наверное, уже знаете Dunlop как производителя медиаторов и других гитарных аксессуаров, но он также производит одни из самых популярных и широко используемых ладов. Другой крупный игрок — JESCAR, который производит одни из лучших в мире качественных ламелей в дополнение к производству отделочных продуктов для профессионалов и энтузиастов автомобилестроения.Давайте посмотрим на основные различия между ними.

Данлоп

Ладовой провод

Dunlop производится в Калифорнии, и если в последние годы вы купили гитару крупного бренда, скорее всего, это будет спортивная гитара Dunlop. Их размеры лада пронумерованы системой нумерации продуктов Dunlop, и хотя существует несколько размеров, пять наиболее популярных размеров следующие (измерение высоты короны x ширины короны):

6230: наименьший размер лада, часто встречается на старинных шеях (.043 ″ x 0,078 ″)

6150: широкий и высокий, более широкий, но короче 6230 (0,042 дюйма x 0,102 дюйма)

6105: современные узкие и высокие (0,055 ″ x 0,090 ″)

6130: средний jumbo — обратите внимание на меньшую высоту (0,036 ″ x 0,106 ″).

6100: большой; обычно выставляется как наибольший доступный размер (0,055 ″ x 0,110 ″)

Dunlop измеряет свои лады в метрической и британской системе мер и дает рекомендации относительно того, как их размеры работают на этом ресурсе.

JESCAR

Jescar потратил много лет на изготовление и производство компонентов и оборудования для оптической промышленности, прежде чем перейти в мир гитарных ладов, и его изделия по-прежнему производятся в соответствии со строгими стандартами на том же немецком заводе, который когда-то производил оправы для очков.Общие размеры (которые полностью соответствуют измерениям Dunlop выше) включают:

FW43080 (0,043 дюйма x 0,080 дюйма)

FW47104 (0,047 дюйма x 0,104 дюйма)

FW55090 (0,055 дюйма x 0,090 дюйма)

FW57110 (0,057 дюйма x 0,110 дюйма)

Выбор лучшего провода и некоторые общие указания по установке

Выбор размера лада — это очень личный выбор, и на самом деле не существует универсального решения, подходящего для всех. Если вам нравятся винтажные гитары Fender, вы можете почувствовать себя как дома с радиусом в винтажном стиле и небольшим размером ладов (и, возможно, из нержавеющей стали, так что вам не придется заново беспокоить свой винтажный инструмент).Если вы измельчитель, вам может быть удобнее использовать большие лады, которые упрощают выполнение таких техник, как постукивание. Люди, которые много сгибаются, могут наслаждаться ощущением джамбо среднего размера.

Когда дело доходит до установки новых ладов на ваш инструмент, следует помнить о нескольких вещах. Если вы играете на связанном грифе инструменте (например, на Gibson Les Paul), вашему технику придется подрезать лапы, чтобы лады комфортно поместились в крепление — это часто является дополнительной платой из-за трудоемкости обрезки лада, но это лучший способ сделать переплет грифа, который будет выглядеть как оригинал.

Если у вас есть готовый кленовый гриф, многие технические специалисты предпочтут повторно снимать гриф с новой отделкой, прежде чем повторно ласкать гриф. Причина этого в том, что при вытягивании ладов на исходной поверхности могут появиться сколы. Вы можете отполировать доску лаком, полиуретаном или даже несколькими слоями оружейного масла. И, конечно же, если у вас есть винтажный инструмент и вы отшиваетесь при мысли о повторной отделке грифа, вы можете попросить техников сохранить оригинальную отделку — в зависимости от грифа это может быть возможно, хотя и немного дороже.

Хотите установить свои лады?

Прежде всего, я рекомендую записаться на курсы, если вы можете найти их поблизости. Научиться перетаривать свой инструмент может быть непросто для новичка, а обучение у мастера сэкономит вам время и деньги в долгосрочной перспективе. Ознакомьтесь с чрезвычайно полезными онлайн-руководствами, выпущенными онлайн-магазином запчастей StewMac, и подберите набор инструментов для фреттинга. Дэн Эрлевин показывает нам, как использовать набор ниже:

Нельзя недооценивать преимущества использования грифового джига как для рефретов, так и для выравнивания ладов — это значительно облегчит вашу жизнь и сделает работу равномерной и ровной.Процесс рефрета очень сложен и требует отдельной статьи, поэтому вместо этого я отсылаю вас к этому рефрету Майка Блумфилда, сделанному на StewMac — довольно крутой материал!

Полировка ладов

Если вы не хотите устанавливать свои лады, а просто хотите поддерживать их в хорошем состоянии, чтобы они служили дольше и играли лучше, не проблема! Базовый уход за ладом — это то, что вы можете сделать сами, хотя важно убедиться, что продукты, с которыми вы работаете, предназначены для гитар и не повредят отделку и т. Д.Я большой поклонник продуктов Music Nomad, так как раз за разом обнаруживал, что они стабильны и безопасны, но есть и другие варианты, которые стоит попробовать.

Перво-наперво — возьмите несколько ладовых масок, особенно если у вас есть готовый кленовый гриф. Используйте маски для ладов, чтобы защитить гриф, независимо от того, какое дерево или отделка у вас есть. В набор для полировки ладов Music Nomad входят маски для ладов различных размеров, а также ткань для полировки и превосходная полировка для ладов Frine, которая помогает удалить окисление.Когда я полирую лады, я обычно выполняю трехэтапный процесс:

  1. Очистите гриф с помощью подходящего средства для чистки грифа — это поможет удалить с грифа грязь.

2. Маскирует лады и полирует лады полировкой для ладов — обычно для тщательной полировки ладов требуется немного смазки для локтей.

3. Смажьте гриф — если, конечно, ваш гриф не является законченной кленовой доской, этот шаг не требуется.

Music Nomad делает маски ладов с ручкой — это необходимо, если у вас много гитар и вы хотите отполировать много ладов

Теперь у вас должно получиться несколько довольно хорошо отполированных ладов — здорово, что иногда можно добавлять в свою программу смены струн, особенно если у вас кислый пот.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *